[发明专利]一种生产非人哺乳类转基因动物的方法

权利要求书

1.一种生产非人哺乳类转基因动物的方法，包括构建含有目标基因的表达质粒载体和将含有目标基因的转基因胚胎移植入受体目的动物体内的步骤，所述目标基因为各种非编码蛋白的功能基因和蛋白质编码基因，其特征在于，所述含有目标基因的表达质粒载体的上游包含真核启动子及其基因表达调控元件序列；在上述步骤中间还含有目标基因的转基因胚胎的培育步骤，所述培育步骤包括以下步骤：

(1)将构建所得的含有目标基因的表达质粒载体与阳离子脂质体混合，室温下，混匀孵育，得到含有目标基因的阳离子脂质体复合物；

(2)将步骤(1)所得的含有目标基因的阳离子脂质体复合物直接转染非人哺乳动物早期胚胎或受精卵中，37℃，5％CO₂条件下共培养4-6小时，筛选报告基因标记，采用分子生物学技术进行检测，得到含有目标基因的转基因胚胎。

2.根据权利要求1所述的生产非人哺乳类转基因动物的方法，其特征在于：所述目标基因为GFP基因。

3.根据权利要求1或2所述的生产非人哺乳类转基因动物的方法，其特征在于：步骤(2)中阳离子脂质体复合体直接转染非人哺乳动物的1-8细胞的胚胎。

4.根据权利要求3所述的生产非人哺乳类转基因动物的方法，其特征在于：步骤(1)中含有目标基因的表达质粒与阳离子脂质体之间按照(1-3)μg∶1μL的比例进行混合。

5.根据权利要求1或2所述的所述的生产非人哺乳类转基因动物的方法，其特征在于：步骤(1)中含有目标基因的表达质粒与阳离子脂质体之间按照(1-3)μg∶1μL的比例进行混合。

6.根据权利要求1或2所述的生产非人哺乳类转基因动物的方法，其特征在于：所述受体目的动物为小鼠、猪、羊、牛或兔。

7.根据权利要求1或2所述的生产非人哺乳类转基因动物的方法，其特征在于：所述非人哺乳类转基因动物为用于基因的功能确证、动物疾病模型建立、转基因药物生物反应器生产以及具有不同功能的生产特性转基因动物。

8.根据权利要求1或2所述的生产非人哺乳类转基因动物的方法，其特征在于：步骤(2)中的采用分子生物学技术进行检测是指采用常规分子方法提取转基因动物组织基因组DNA，采用PCR技术检测目标基因；采用常规Southern blotting法检测目标基因组在转基因动物染色体中的整合；采用常规Western Blotting法检测目标基因在转基因动物组织中的表达。