[发明专利]一种芸薹属植物对根肿病抗性的鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属芸薹属作物抗病性鉴定技术领域，具体涉及对根肿病抗性的鉴定方法。 

背景技术

根肿病（club root）是由芸薹根肿菌（Plasmodiophora brassicae）侵染植物引起的一种世界性病害。芸薹根肿菌属真菌界鞭毛菌亚门根肿菌纲根肿菌属（Plasmodiophora），是专一侵染芸薹属植物的致病性病原菌，该病原菌侵入植物根毛、皮层、形成层，产生含有植物生长激素的病菌分泌物，刺激薄壁细胞的异常分裂增大，在增生部位膨大形成瘤状的肿根。肿根的出现一方面降低了根系吸收和供给水份及养份的能力，造成地上部分失水、枯黄和死亡；另一方面使植物根系失去了外层的保护作用，易被其它杂菌入侵而引起腐烂。芸薹属植物（Brassica）是根肿菌的专一性寄主，在高温、高湿和酸性的环境条件下，有利于病害发生，可导致作物产量严重下降，甚至绝收。云南是典型的高原红壤，酸性较重，夏天的时候气温高、湿度大，根肿病发生严重。虽然经过了诸多年药剂防治的研究，但根肿病有“植物的癌症”之称，药剂防治效果不突出。

应用抗病品种预防根肿病的发生是最安全而又十分经济的一种方法。但应用抗病品种，首先需要建立品种抗病能力的检测方法。芸薹根肿菌是寄生性真菌，目前尚不能人工培养，所以无法进行人工接种鉴定。传统的方法是将品种种植在根肿病严重的地块进行检测，或将根肿病病根、菌土带回单位，搭建小拱棚种植品种，进行鉴定。这两种方法都难以保证鉴定条件的一致性，而且费工、费时，难以完成规模化的品种鉴定需求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术对根肿病的抗性鉴定存在难以保证鉴定条件的一致性，费工、费时，难以完成规模化的品种鉴定的缺陷和不足，其目的是提供一种芸薹属植物对根肿病抗性的鉴定方法。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种芸薹属植物对根肿病抗性的鉴定方法，其步骤如下：

（1）培养基质的制备

用珍珠岩和打碎的芸薹根肿菌菌根混合而成的混合物作为培养基质，珍珠岩在使用前用pH为5.0～5.5的酸性水浸泡72～96小时以上，珍珠岩与打碎的芸薹根肿菌菌根混合的比例为1升：10～15克； 

（2）培养基质的填充

用冷冻盒作为培养器皿，将冷冻盒的每一格底部打一个孔，将培养基质填充在冷冻盒的格内，培养基质的高度低于格子高度2mm～3mm；

（3）播种

将待鉴定品种的种子播于冷冻盒的格内，每一格播1粒种子，播种后再覆盖一层培养基质，使培养基质的高度与冷冻盒的格子高度一致，盖上盒盖，将冷冻盒置于瓷盘内或不锈钢盘内；

（4）接种菌液的制备

用1/2MS培养基作为培养液，将打碎的芸薹根肿菌菌根和所述的培养液混合，制成病菌孢子含量为1×10⁸个/毫升以上的溶液，用1mol/L的盐酸溶液调节溶液的pH为5.5即制成接种菌液；

（5）将接种菌液注入所述的瓷盘内或不锈钢盘内，使接种液的高度为0.5~1.0cm；

（6）每一鉴定批次用感根肿病的感病品种作为对照；

（7）将注入了接种菌液的瓷盘或不锈钢盘及其盘内的冷冻盒一起置入人工气候箱内，30℃暗培养3天，保持空气湿度在48～52%，3天后，打开盒盖和气候箱光源，转入光照生长，光照时间12 h/d，光照强度5300～5500lx，调节空气湿度在75%～80%，调节人工气候箱的温度为24℃～26℃；

（8）病情指数的调查统计

对照材料在培养基质以上的叶片萎蔫和根部肿大时，按单株病症分级标准进行调查统计，计算病情指数，根据调查的病情指数，按群体抗性分级标准鉴定出待鉴定品种对根肿病的抗性；

所述的单株病症分级标准是：

病级  病症

0 级：根不膨大，

1 级：根膨大，根直径＜0.3厘米，

2 级：根膨大，0.3厘米≤根直径≤0.6厘米，

3 级：根膨大，根直径＞0.6厘米；

病情指数的计算公式是：

所述的群体抗性分级标准是：

群体抗性分级   病情指数

免疫(I)：        0.00—0.10；

高抗(HR)：     0.11—5.55；

抗病(R)：       5.56—11.11；

耐病(T)：       11.12—33.33；