[发明专利]检测蜡样芽孢杆菌的免疫胶体金试纸及其制备方法

说明书

本发明所属的技术领域 

本发明涉及一种检测蜡样芽孢杆菌的免疫胶体金试纸及其检测方法，同时还涉及该试纸相关试剂的制备方法。 

发明的背景技术 

蜡状芽孢杆菌广泛存在于土壤、空气、水和尘埃中，因此无法避免地会污染到食品中。几乎所有种类的食品都曾被报道与蜡状芽孢杆菌引发的食物中毒有关，主要有：乳品、米、蒸煮的米饭和炒饭、调料、干制品(面粉、奶粉等)、豆类和豆芽、肉制品、焙烤食品等。 

所有芽孢杆菌种类能形成热稳定内生孢子，蜡样芽孢杆菌孢子是食源性疾病的一个重要因子。孢子的D95℃从低于1min到超过30min，观察不到孢子的新陈代谢活动，但孢子可以在没有营养的条件下存活许多年。内生孢子是休眠、硬的和非再生结构。内生孢子最初的功能是确保细菌能承受环境压力。孢子高度耐热、干燥、有毒化学物质、UV射线、γ射线和其他不利的环境因素。芽孢杆菌孢子是最耐受灭活的生命形式 

蜡状芽孢杆菌是条件致病菌，偶尔能导致人的眼部感染，甚至是心内膜炎、脑膜炎和菌血症等疾病，但最常见的是导致两种不同类型的食物中毒：腹泻型和呕吐型。一般认为肠毒素在胃中会被破坏，所以腹泻型食物中毒是由残留下来的蜡状芽孢杆菌(芽孢或菌体)在小肠中生长、产肠毒素引起的，具体过程尚未完全明了。多数情况下，引起该类食物中毒的食品中蜡状芽孢杆菌的数量在105～108CFU/g，也有在数量较低的情况下(10³～10⁴CFU/g)导致食物中毒的。其症状类似于产气荚膜梭状芽孢杆菌(Clostridium perfringens)食物中毒：水样腹泻、腹部痉挛和疼痛，呕吐很少见。常因食用肉类、海鲜、乳品和蔬菜等食物引起，潜伏期一般为6～15h，一般持续24h；而致呕吐的毒素是该菌在食物中预先产生的，该毒素非 常稳定，进入人体后在胃中与其受体5-HT3结合，导致呕吐。所以尽管有时食物中检出的蜡状芽孢杆菌数量很低(10²CFU/g)，却仍能引发呕吐中毒。呕吐型食物中毒的潜伏期一般为0.5～6h，一般限于富含淀粉质的食品，特别是炒饭和米饭。主要症状为恶心、呕吐，有时有腹泻、头晕、发烧和四肢无力等症状，与金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)引发的食物中毒相似。从目前的报道看，由蜡状芽孢杆菌引起的食物中毒在亚洲以呕吐型比较常见，而在欧洲和北美地区则以腹泻型更常见。 

目前，食品中蜡样芽胞杆菌的检测主要采用传统的细菌分离及生化鉴定方法，该法费时费力，极大限制了在食品加工中对该菌污染的有效监控.为提高食品安全性，建立一种快速灵敏的检测方法十分必要。 

免疫层析法(Immunoehromatography)是20世纪90年代兴起的一种快速诊断技术，胶体金免疫层析技术(GICA)就是利用胶体金本身的显色特点结合免疫层析技术诊断特异性的待测物而发展起来的。在该技术基础上研制的胶体金免疫层析试纸条具有特异性强、灵敏度高、制作方便、价格低廉、容易操作、结果直观、无须仪器设备等优点，满足了现场快速检测及实时监测等方面的要求，具有广泛的应用价值。本发明所解决的问题 

本发明以蜡样芽孢杆菌作为检测对象，可以同时检测蜡样芽孢杆菌菌体和芽孢，可以克服传统方法检测中无法区分蜡样芽孢杆菌菌体和芽孢的缺点。结合胶体金免疫层析技术使本发明的检测方法更加特异、快速、针对性强，实用和方便。 

发明内容

本发明提供了一种检测样品中蜡样芽孢杆菌的免疫胶体金试纸及其制备方法。该试纸条由样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水纸及PVC底板组成。PVC背衬一端依次粘有样品垫、胶体金垫、中间部附 有硝酸纤维素膜、另一端粘附有吸水纸。所述样品垫与所述胶体金垫之间有搭接；所述硝酸纤维素膜与胶体金垫之间有搭接；所述硝酸纤维素膜与吸水纸之间有搭接；所述胶体金垫是有吸附有胶体金标记的抗蜡样芽孢杆菌的单克隆抗体的玻璃纤维素膜构成，所述硝酸纤维素膜上分别包被有抗蜡样芽孢杆菌多克隆抗体构成的检测线和兔抗鼠的lgG构成的质控线。 

用于检测蜡样芽孢杆菌的免疫胶体金试纸条及其制备方法，填补了目前国内尚未有检测蜡样芽孢杆菌免疫胶体金试纸条的空白和检测蜡样芽孢杆菌菌体和芽孢的快速检测方法的空白。本发明具有以下优点： 

1、本发明的检测蜡样芽孢杆菌的免疫胶体金试纸条，具有特异性强、灵敏度高、检测时间短的优点。 

2、本发明的检测试纸条不需要特殊仪器、设备，技术简单，检测成本低。 

该试纸的制备方法包括以下步骤： 

1)抗原的制备