[实用新型]胶体金层析法抗Cenp-B抗体检测试纸

说明书

技术领域

本实用新型属于医学免疫应用领域，具体涉及到利用胶体金免疫层析技术检测抗Cenp-B抗体的试纸。 

背景技术

1980年Moroi等首次发现抗着丝点抗体(Anti-Centromere Antibody，ACA)。早期研究显示ACA常见于局限于皮肤病变的系统性硬化症(CREST综合症)患者血清中。采用蛋白质印迹法检测染色质提取物，发现其主要靶抗原为CENP-A、CENP-B、CENP-C。但CENP-B为主要的抗原表位。因此本实用新型选择了Cenp-B的优势表位克隆化表达为检测抗原。(Earnshaw W，Bordwell B，Marino C，et al.Their human chromosomal auto antigens are recognized by sera from patients  with anticentromere antiboedies.J Clin Invest，1986；77：426-430)。 

抗Cenp-B抗体可用Hep-2细胞系快速法和间接免疫荧光法检测到。其抗原位于着丝点内外层，但不包括DNA。其三个主要抗原为CENP-A蛋白(19KD)，CENP-B蛋白(80KD)和CENP-C蛋白(140KD)。其中CENP-B抗原在诊断中起主要的作用。因为它是所有ACA(着丝点)抗体共有的靶抗原。 

抗Cenp-B抗体主要出现于一定形式的进行性系统性硬化症(PSS)中，尤其是CREST综合症(皮内钙质沉着，Raynaud现象，食管运动功能混乱，指端硬化，远距离血管扩张)，其检出率为50-70％。ACAs对PSS的预后较佳，出现此抗体时，在CREST综合症病人中极少观测到心肺肾的病变(Earnshaw W，Bordwell B，Marino C，et al.Their human chromosomal auto  antigens  are  recognized  by  sera  from patients  with anticentromere antiboedies.J Clin Invest，1986；77：426-430)。 

抗Cenp-B抗体可在25％的表现出Raynaud现象的患者中检测到。由于它与胶原病的发生有关，抗Cenp-B抗体的测定对此病的预测极为重要。 (Whyte J，Soriano E，Earnshaw WC，et al.Frequency of autoantibodies  to  a  major  epitope  on the  carboxyl  terminal fragement of CENP-B in patients with autoimmune disease，Brit J Rheumatol，1995；34：407-412.)。 

抗Cenp-B抗体也可见于原发性胆汁性肝硬化(10％-20％)。但在单独的肺动脉高压症，SLE和原发性干燥综合症患者中，此抗体极少出现(Mahler M，Mierau R，Bluthner M.Fine-specificity of the anti-CENP-A B-cell autoimmune response.J Mol Med，2000；78(8)：460-467.)。 

目前实验室常用的检测抗Cenp-B抗体的方法主要有酶联免疫吸附剂试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、间接免疫荧光法(indirect immunoflurescence，IFF)、免疫印迹法(immunoblotting test，IBT)、线性免疫分析法(Line immuno assay，LIA)等。 

免疫印迹法虽综合了SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特异性和敏感性，但操作相对复杂，完成整个实验过程需三小时左右，亦需要专业免疫学技术人员在实验室中进行实验操作，同时易受各种温度和孵育时间等环境条件因素的影响，对试验带来诸多不便。且试剂具有较强的毒性和污染性。目前市场上商品化抗Cenp-B抗体抗体检测试剂盒主要为免疫印迹法。 

间接免疫荧光法可作半定量测定，但需要专业人员操作特殊的荧光显微镜观察结果，结果判定有一定的主观人为判断误差，客观性不足；另外易受其他干扰产生假阳性，标准化困难，技术程序比较复杂，检测时间长，也不适合高通量标本的检测。 

线性免疫分析法主要用于疾病大类的筛查，针对性相对较差，同时也不适合高通量样本的检测。