[实用新型]过滤染色计数细胞的装置

说明书

技术领域

本发明涉及一种测量装置，具体地说，是关于细胞计数的装置。

背景技术

细胞计数是在生命科学研究，尤其是在细胞培养相关实验和生产中经常使用的技术。现有细胞计数方法各有局限：经典的血球计数板法及其系列衍生方法(如申请号为01213605.0的中国专利所述细胞计数方法)虽然测量直观，但由于细胞分散不利或检测人员的熟练程度等原因会产生计数误差，且单个样本计数耗时较长，无法同时对大量样本进行操作，降低了实验结果的平行性；染色法虽然可以满足批量操作的要求，但是往往仅适用于贴壁生长的细胞(如日本专利WO2006003696)，对于悬浮生长的细胞还需若干操作才能完成，从而影响了计数的批处理程度，降低了计数的准确性。

发明内容

为了克服现有技术计数准确度不高、不易于实现自动化的缺点，本发明提供了一种操作简单，主观度数因素少，易于实现自动化批处理的细胞计数方法。

本发明所采用的技术方案包括洗涤液容器、染色液容器、脱色液容器、废液容器、过滤装置、泵系统、比色装置、三通阀和计算机。实验组及标准组细胞悬液通过三通阀分别与洗涤液容器、染色液容器相连通，之后通过三通阀与脱色液容器相连通至过滤装置，过滤装置的输出口通过泵系统与比色装置相连，比色装置将测量数据反馈于计算机。待检测完成后，由和比色装置相连的导管将废液排除到废液容器中。在上述各个环节中，由计算机控制各个三通阀、泵系统以及比色装置工作。

所述的洗涤液采用细胞悬液2倍以上体积的磷酸盐缓冲液。

所述的染色液采用细胞悬液1倍以上体积的浓度为0.1％～1％的结晶紫溶液，采用水、生理盐水或PBS缓冲液作为溶剂配制。

所述的脱色液采用细胞悬液1倍以上体积的浓度为3％～30％的醋酸溶液。

本发明工作时包括以下步骤：

1.准备好需要计数的未知数量的实验组细胞和至少4组已知数量的标准组细胞悬液，所述细胞悬液可由悬浮生长细胞直接使用，或贴壁细胞经过消化步骤形成，各组细胞悬液的体积相同；

2.每个细胞悬液样品对应一个过滤装置，分别将各组细胞悬液通过过滤装置，使细胞截留在滤膜之上；

3.分别使用细胞悬液2倍以上体积的磷酸盐缓冲液(PBS)清洗截留在过滤装置上的细胞；

4.分别加入细胞悬液1倍以上体积的浓度为0.1％～1％的结晶紫溶液于过滤装置中浸泡细胞10分钟～1小时；

5.分别吸去结晶紫溶液，用细胞悬液5倍以上体积PBS清洗过滤装置中的细胞；

6.分别排出过滤装置中残存液体；

7.分别用细胞悬液1倍以上体积的浓度为3％～30％的醋酸溶液冲洗过滤装置，收集滤液；

8.分别将所得滤液经稀释3倍体积以上后，使用可见分光光度计，测量570nm波长处光密度；

9.结合标准组已知细胞数量与光密度绘制标准曲线，得到光密度I_标准与细胞数量N_标准的关系公式：I_标准＝a×N_标准+b，其中a为一元线性相关系数，b为截距，皆通过标准曲线计算得知；

10.根据标准曲线和实验组细胞样品的光密度计算实验组细胞数量，即N_实验＝(I_实验-b)/a。

本发明的有益效果是：由于采用过滤装置对细胞悬液进行过滤，截留细胞，已过滤装置中的滤膜作为固相支持载体，对其上细胞进行染色、冲洗、脱色等处理，最终利用结晶紫洗脱液的光密度来计算细胞数量。与现有技术相比，本发明体现了减少主观度数因素对结果的影响，易于实现自动化批处理，以提高测定精度及结果平行性的有益效果。

下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。

附图说明

图1是本发明的方法流程图；

图2是本发明的装置示意图；

图中，1-实验组及标准组细胞悬液，2-洗涤液容器，3-染色液容器，4-脱色液容器，5-过滤装置，6-泵系统，7-比色装置，8-废液容器，9-计算机，10-三通阀b，11-三通阀a，12-三通阀c。

具体实施方式

装置实施例：

本发明同时设计用于过滤染色计数细胞方法的装置。装置包括：洗涤液容器、染色液容器、脱色液容器、废液容器、过滤装置、泵系统、比色装置、三通阀、计算机。

具体说明如下：