[实用新型]巨细胞病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸

说明书

技术领域

本实用新型是涉及生物应用技术领域，特别是涉及一种以胶体金免疫层析法快速检测巨细胞病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸 

背景技术

巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)属于疱疹病毒亚科，是人疱疹病毒科中最大、结构也最复杂的病毒。巨细胞病毒感染在人群中较广泛，大多数呈临床非显性感染或潜伏感染，在绝大数免疫正常个体，呈现无症状感染；但在免疫缺陷个体、胎儿和婴幼儿个体可出现明显病症，显性感染则有多样化的临床表现，严重者可致死。HCMV是引起新生儿先天性感染的重要病原体微生物之一。在孕妇，原发或新的HCMV复发感染均可引起新生儿宫内感染或围生期感染，可导致死胎、流产、早产，及先天畸形，智力发育障碍，严重可引起巨细胞包涵体病，故该病的防治工作影响到优生优育和人口质量。 

目前对巨细胞病毒检测的主要方法是巨细胞病毒特异性抗体检测。检测巨细胞病毒IgM判定是否为现症感染，检测IgG判定是否曾经感染过。检测两种抗体有利于对被检对象的进行全面的判定，指导优生优育。目前巨细胞病毒抗体的检测方法主要是ELISA等检测方法。在胶体金的检测方法中，有单独检测巨细胞病毒IgM或IgG的报道，但用胶体金类免疫层析技术同时检测巨细胞病毒IgM和IgG抗体的检测试纸尚未有相关报道。和用两种试剂分别检测IgM和IgG抗体相比，同时检测IgM和IgG抗体能减少检测人员的工作量，节约成本；同时减少采血量，减少患者的痛苦。 

免疫层析胶体金技术是新型的诊断技术，在抗体检测方面已得到较为广泛运用，基本原理如下：利用胶体金标记一种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，形成肉眼可见的检测T线，通过检测线的有无实现对结果的判定。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性 强、适合现场检测和经济实用等优点。 

发明内容

本实用新型的目的是提供一种巨细胞病毒IgM和IgG抗体检测试纸，具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。 

本实用新型提供一种巨细胞病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，其特征在于塑料支撑板(8)一端粘贴上样垫(1)，上样垫(1)的一端紧密压接含有标记巨细胞病毒特异性的抗原p150或p52或gB的胶体金垫(2)，胶体金垫(2)一端紧密压接硝酸纤维素NC膜(3)，硝酸纤维素膜包被有相互分离的检测线T1(5)、检测线T2(6)和质控C线，检测线T1(5)为抗人IgM抗体，检测线T2(6)为抗人IgG抗体，质控C线(7)为抗巨细胞病毒P150或p52或gB抗体，硝酸纤维素膜的另一端连接吸样垫(4)形成试纸。 

所述的巨细胞病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，其特征在于所述的抗原为巨细胞病毒特异性的主要抗原p150或p52或gB抗原，抗原可以利用基因工程重组表达或在培养病毒中纯化。 

所述的巨细胞病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，其特征在于所述的上样垫(1)为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫(4)由吸水滤纸构成。 

所述的巨细胞病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，所述的抗原的包被方法为：以0.01M pH 7.2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgM抗体配制成1-2mg/ml的溶液，以0.01M pH 7.2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgG抗体配制成1-2mg/ml的溶液，用喷膜仪在NC膜下部以1-1.5ul/cm的参数进行划线，包被T1、T2线，同时在NC膜上部包被抗巨细胞病毒P150抗体作为C线，划线后将NC膜在干燥间，温度20-25℃，湿度小于30％，干燥2-5小时。 

所述的巨细胞病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，所述的抗原标记胶体金颗粒的方法为：以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30-50nm的胶体金溶液，制备完成后取100ml胶体金液放在烧杯内，用0.2M K₂CO₃调至pH8.0，按100ml胶体金溶液加入0.5-2mg巨细胞病毒p150、p52、gB 抗原，室温搅拌2小时，加入1％牛血清白蛋白BSA，1％聚乙二醇PEG20000封闭20min，12000r/m离心30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至100ml，按1ml溶液铺20cm²的比例均匀地铺在玻璃纤维膜或无纺布上，再置干燥间，温度20-25℃，湿度小于30％，干燥2-5小时，制成胶体金垫。