[发明专利]O-磷酸丝氨酸巯解酶突变体以及利用其生产半胱氨酸的方法

权利要求书

1.源自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的O-磷酸丝氨酸巯解酶(OPSS)突变体，其具有与SEQ ID NO：1相同的氨基酸序列，其中所述源自耻垢分枝杆菌的O-磷酸丝氨酸巯解酶(OPSS)突变体缺少野生型OPSS氨基酸序列的三至七个C-末端氨基酸残基。

2.根据权利要求1所述的源自耻垢分枝杆菌的OPSS突变体，其缺少五个C-末端氨基酸残基。

3.根据权利要求2所述的源自耻垢分枝杆菌的OPSS突变体，其具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所述的源自耻垢分枝杆菌的OPSS突变体，其中77位脯氨酸残基(Pro)被丝氨酸残基(Ser)取代。

5.根据权利要求4所述的源自耻垢分枝杆菌的OPSS突变体，其具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列。

6.根据权利要求1所述的源自耻垢分枝杆菌的OPSS突变体，其中131位苏氨酸残基(Thr)、137位赖氨酸残基(Lys)和238位苏氨酸残基(Thr)分别被丙氨酸残基(Ala)、天冬酰胺残基(Asp)和丝氨酸残基(Ser)取代。

7.根据权利要求6所述的源自耻垢分枝杆菌的OPSS突变体，其具有SEQ ID NO：4的氨基酸序列。

8.根据权利要求1所述的源自耻垢分枝杆菌的OPSS突变体，其在以下条件下显示出最佳活性，包括：

i)加入约0.001～约2mM PLP(5’-磷酸吡哆醛)或约0.001～约100mM DTT(二硫苏糖醇)作为辅因子；

ii)反应温度25～60℃；以及

iii)pH 6.0～10.0。

9.编码权利要求1-8任一项所述OPSS突变体的核酸分子。

10.含有编码权利要求1-8任一项所述OPSS突变体的核酸分子的表达载体。

11.用权利要求10所述表达载体转化得到的转化体。

12.一种生产半胱氨酸的方法，其包括在权利要求1-8任一项所述OPSS突变体存在下，使O-磷酰-L-丝氨酸(OPS)与硫化物发生反应。

13.根据权利要求12所述生产半胱氨酸的方法，其中OPS为纯化形式或含OPS的发酵培养物的形式。

14.根据权利要求12所述生产半胱氨酸的方法，包括选自Na₂S、NaSH、(NH₄)₂SH、H₂S和S₂O₃的硫化物，其全部为气态或液态。

15.根据权利要求12所述生产半胱氨酸的方法，其中硫化物的用量是OPS摩尔浓度的0.1～3倍。

16.权利要求1-8任一项所述OPSS突变体在由OPS生物合成半胱氨酸中的应用。