[发明专利]用于预测心血管事件的外来体生物标志物的确定

说明书

技术领域

本发明涉及风险分层（分级）和/或患者分层（分级）领域，更具体地，涉及心血管事件的风险预后，所述心血管事件如中风、短暂性缺血性发作（TIA）、心肌梗塞（心脏病发作）、脑出血以及在血管中发生的其他主要异常。

本发明尤其涉及预测受试者发展心血管事件风险的方法以及在该方法中使用的试剂盒和生物标志物。

背景技术

已经将包括血脂异常、吸烟、高血压和糖尿病在内的已确立的心血管风险因子引入到心血管风险评估的算法中。然而，对处于发展心血管疾病风险中的患者的鉴别仍是困难的。

预后生物标志物的鉴别在分辨处于经历未来心血管事件风险并因此可以成为侵略性预防措施目标的患者时将具有主要附加价值。对于原发性心血管事件，由于生物标志物仅适度地加入到标准风险因子中，因此这些生物标志物的预后值是非常有限的。对于继发性事件，并不存在预后生物标志物。

寻找生物标志物的理想方法为无偏（unbiased）方法。诸如蛋白质组学的新型分子技术为这一目的开启了新的可能性。

最近，在本发明人的实验室中，该技术被成功用于发现动脉粥样硬化斑块中的心血管疾病的生物标志物。遗憾的是，只能通过侵入性程序获得斑块材料。因此，本发明的目的是提供用于预测受试者发展心血管事件风险的替代方法。

发明内容

在引出本发明的研究中，对人类斑块和血浆样品进行了蛋白质组学分析。然而，该程序受所存在的高丰度血浆蛋白（如白蛋白和免疫球蛋白）阻碍，这使得对潜在关注的低丰度蛋白的检测复杂化。因此，对血浆子部分研究了可能会对心血管事件具有预测价值的蛋白质的存在。

随后，据发现采样后来自经历心血管事件的受试者的血浆外来体样品中的蛋白质组成不同于未经受该心血管事件的患者中的组成，并且这种差异能够用于患者预后。

可以在产生后直接发生蛋白质向细胞外的分泌（组成型途径）或者蛋白质首先储存在细胞中并在触发后释放（调控型途径）。然而，分泌不仅发生在单独的蛋白质中，而且还通过含有大量蛋白质和RNA的囊泡发生。由来自分泌细胞的所选择的脂肪、蛋白质和RNA形成了这些囊泡，并且它们作为完整的囊泡释放。尺寸为50nm-100nm的囊泡被称为外来体（exosome），并且已对多种细胞类型描述了外来体的释放，包括网织红细胞、B淋巴细胞和T淋巴细胞、树突细胞、肥大细胞、血小板、巨噬细胞和肺泡肺细胞。在包括T细胞、血小板、树突细胞和肥大细胞在内的几种细胞类型中，外来体的分泌是通过特定刺激物所调控的。

尽管早期研究关注于它们从不同细胞类型的体外分泌，但现已在体液中鉴别出了外来体，所述体液如尿液、羊水、恶性腹水、支气管肺泡灌洗液、关节液、乳汁、唾液和血液。外来体具有广泛的生物学功能，包括免疫应答、抗原呈递、胞内通讯以及RNA和蛋白质的转移。

本发明人发现由于外来体表达了反映起源宿主细胞的一系列蛋白质，因此它们包含了与人体内发展中的（病理）生理过程有关的有价值信息，包括未来心血管事件的信息。

现在，该出人意料的发现引出了本发明，因此基于对来自所述受试者的血浆外来体样品和/或尺寸较小或较大的其他微囊中具有预后价值的蛋白质（本文随后称之为生物标志物或差异存在的蛋白质）的检测，本发明提供了用于预测患者中心血管事件风险的方法。

根据本发明，原则上可以使用具有预后价值的任何生物标志物。然而，尤其是，在对继发性心血管事件具有预测价值的血浆外来体中鉴别了特定标志物。

在一个实施方式中，本发明因此提供了预测受试者发展心血管事件风险的方法，包括检测来自所述受试者的外来体样品或尺寸较小或较大的其他微囊中的生物标志物，其中所述生物标志物包括选自以下6种蛋白质中的至少一种蛋白质：玻连蛋白（IPI:IPI00298971，SWISSPROT:VTNC_HUMAN）、丝氨酸蛋白酶抑制蛋白F2（IPI:IPI00879231，SWISSPROT:A2AP_HUMAN）、CD14（IPI:IPI00029260，SWISSPROT:CD14_HUMAN）、胱抑素C（IPI:IPI00032293，SWISSPROT:CYTC_HUMAN）、纤溶酶原（IPI:IPI00019580，SWISSPROT:PLMN_HUMAN）、巢蛋白2（IPI:IPI00028908，SWIS SPROT:NID2_HUMAN）。