[发明专利]免疫组织化学染色用前处理液和其浓缩液

说明书

技术领域

本发明涉及免疫组织化学染色用前处理液和其浓缩液，所述前处理液能够以短时间且省力地实施免疫组织化学染色法，所述免疫组织化学染色法为：从被含石蜡的包埋介质包埋在载玻片等中的作为抗原的组织待测物溶出该包埋介质、活化抗原性后，洗涤，与抗体反应，染色。更详细而言，涉及同时具有从免疫组织化学染色中使用的、含有被含石蜡的包埋介质包埋的组织待测物的载玻片溶出该包埋介质的作用和活化抗原性的作用，在此后的免疫组织化学染色中也能够获得充分的染色强度，进而一旦使用后也能够使溶出的包埋介质维持分散状态，能够连续使用3次以上的用于实施免疫组织化学染色的免疫组织化学染色用前处理液和其浓缩液。

背景技术

在病理检查中，就含有用于进行免疫组织化学染色的组织待测物的载玻片的脱石蜡和活化抗原性的前处理而言，例如如非专利文献1记载那样，通常作为第1工序，使经福尔马林固定·石蜡包埋的组织切片3分钟×3次通过二甲苯、苯、甲苯等有机溶剂层，进行脱石蜡。然后，作为第2工序，使其3分钟×4次通过乙醇等两亲性溶液，进行载玻片和组织待测物的亲水化。接下来，作为第3工序，为了活化经亲水化的组织待测物的抗原性，将经亲水化的组织待测物浸渍到柠檬酸缓冲液、Tris-EDTA溶液等抗原活化用溶液中，利用加热处理进行抗原的活化。

在上述前处理中，第1工序中使用的二甲苯、苯、甲苯等有机溶剂毒性强、挥发性也高，因此存在需要通风室等排气设备、导致操作者所处环境恶化的问题。

因此，作为代替存在上述问题的有机溶剂的安全性高的脱石蜡剂，由柑橘类表皮提取·纯化的有机溶剂、商品名“Hemo-De”（株式会社Falma公司制）以及使用了脂肪族烃（烷烃系）的商品名为“Clear-Plus”和“Hemo-Clear”（均为株式会社Falma公司制）、商品名为“Tissue-Clear（テイシユ一·クリア）”（Sakura Finetek Japan Co.,Ltd.制）等产品已在销售。

近年，与使用上述安全性高的脱石蜡剂相比，期待在同一溶液中同时进行上述前处理中的3个工序的更简便的方法，并已经提出了几种方法。

例如，专利文献1中提出如下前处理方法，即，对被石蜡包埋的组织待测物，使用配合了选自芳香族烃、萜或异构烷烃系烃的石蜡增溶化有机溶剂、极性有机溶剂、抗原性活化成分、和表面活性剂等的溶液，加热至石蜡的融点以上的温度，从而同时进行脱石蜡和抗原性活化处理的前处理方法。此外，专利文献1中还记载了在上述前处理方法之后实施的洗涤工序中，为了除去残存的表面活性剂，可以使洗涤溶液中含有与表面活性剂结合的环糊精。

但是，专利文献1的实施例7中记载了如下问题，即，在将用于前处理方法中的上述溶液连续使用时，前处理后的上述溶液中溶出的残留石蜡附着到下一载玻片而不适合连续使用。

进而，在将专利文献1中记载的具有上述组成的溶液制成具有碱性的pH的溶液时，在贴合了组织待测物的载玻片中的不存在组织待测物的玻璃部分，在上述前处理方法后所进行的免疫组织化学染色时，存在有很可能染色试剂被排斥、发生染色不均的问题。

此外，专利文献2和3中也记载了使用含有各种缓冲液、表面活性剂、乙二醇等的溶液能够与专利文献1中记载的上述前处理方法同样地同时进行脱石蜡和抗原性活化处理。

但是，这些文献中也与专利文献1记载的前处理液同样地无法谋求前处理液的连续使用，对于使溶出的石蜡分散至溶液中等的技术没有任何记载。因此，这些文献中记载的前处理液，在连续使用时也可能发生上述的与专利文献1中记载的前处理液同样的问题。

然而，已经有几种免疫组织化学染色中使用的、能够同时进行脱石蜡和抗原性活化处理的前处理液在市场上销售。例如，如上述专利文献中记载的仅1次使用型的商品名为“Trilogy”（Cell Marque公司制），以及1周内能够连续使用3次的商品名为“Target Retrieval Solution”pH9（3-in-1）（Dako公司制）已在市场上销售。

这些市售品的配合组成虽不明确，但并不含环糊精。此外，任一制品大多产生如下现象，即，由于使用而溶出至前处理液的疏水性物质石蜡大多漂浮在溶液表面。

这样的处于溶液表面的漂浮石蜡在从该溶液取出含有组织待测物的载玻片时附着于载玻片，产生了需要增设在此后实施的染色之前进行的洗涤工序、操作变得复杂或可能对之后进行的免疫组织化学染色产生不良影响等问题。进而，在使用自动免疫组织化学染色仪器进行染色时，可能对该仪器产生不良影响。

现有技术文献

专利文献