[发明专利]用于检测雌马酚的测试条

说明书

技术领域

本发明涉及在水溶液中通过颜色变化来检测雌马酚的测试条及其相关方法和用途。

背景技术

异黄酮类（isoflavones）（也被称为异黄酮类（isoflavonoids））是通常显黄色的化合物，这些化合物是异黄酮类和黄酮类（flavonoids）的衍生物。异黄酮类是来自于植物的次生化合物，除此之外其在植物防御病原体中发挥作用。在苜蓿物种中发现了异黄酮的骨架主体。一些熟知的异黄酮类有在大豆粉中作为葡萄糖苷的大豆苷而发现的大豆苷元（daidzein）、来自于大豆和红花苜蓿的染料木素（genistein）、来自于李树树皮的樱黄素（prunetin）、来自于鹰嘴豆和苜蓿的鹰嘴豆芽素A（biochanin A）、香豌豆苷元（orobol）、来自于八婆木、红木和其他树木的檀黄素（santal）以及来自于新鲜的红花苜蓿的红车轴草素（pratensein）。异黄酮大豆苷元[4',7-二羟基异黄酮；7-羟基-3-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮]发现于大豆中并且属于许多食品和营养补充剂的一部分。

异黄酮雌马酚[4',7-二羟基异黄烷；3-(4-羟基苯基)-7-色原烷醇]产自于消耗大豆苷元以后的肠道菌群。据推测，该转化通过链球菌（streptococci）、乳酰胺酸菌（lactamid acid bacteria）和双歧杆菌（bifido bacteria）来实现。在大豆或任何其他植物中未发现有雌马酚。因此，雌马酚是植物次生代谢物群体中的一部分。

雌马酚具有温和的雌激素样活性（甾体雌激素活性的0.1%）并且能够与雌激素受体ERα和ERβ结合。许多有益效果均归功于雌马酚，例如降低胆固醇的效果、抗炎效果、对于乳腺癌以及停经后生理变化的积极效果。由于与5α还原酶的相互作用，雌马酚还抑制男性的DHT生产。据推测，DHT是男性形成前列腺癌的诱因。其他益处可以是治疗男性型脱发、痤疮以及与DHT相关的其他问题。

在消耗富含大豆苷元的食品之后，如果人能够生产雌马酚，那么在血液和尿液中就能够检测到雌马酚。然而，仅仅约三分之一（高加索人群）最高一半（日本人群）的人类能够由大豆苷元生产雌马酚。与不能够生产雌马酚的人类相比，富含大豆的膳食的积极效果在能够生产雌马酚的人类（“雌马酚生产者”）中更加明显。

为了预测富含异黄酮的膳食是否有益于人，有必要检测该人是否为雌马酚生产者。该项检测的方便的方式似乎是检测尿液中的雌马酚。在本领域中描述了各种用于检测雌马酚的方法。

WO 2004/009035A2涉及雌马酚的各种有益效果。根据该文献，在通过高效液相色谱法（HPLC）的纯化之后，通过质谱的后续分析检测雌马酚。因此，该方法需要复杂和昂贵的仪器。

JP 2006-242602中公开了用于检测雌马酚的另一种方法。该文献的目的在于提供一种简化的方法，其不需要HPLC或质谱。为了解决该问题，发明人提供了两种方法。第一种方法基于采用薄层色谱法的样品分离。该方法需要采用用于除去糖类的酶来预处理样品。在色谱法分离异黄酮类以后，采用溶剂将薄层板展开。然后，进行用于肉眼观察异黄酮类的步骤，如将薄层板置于碘蒸汽中。尽管避免了诸如HPLC柱和质谱的复杂仪器，但是该方法还是相对复杂的并且需要不能轻易处理的化学品。第二种方法需要培养微生物并且也是复杂的。

JP 2006-242602的发明人随后发表了一篇名为“Rapid and Convenient Detection of Urinary Equol by Thin-layer Chromatography”；（J Nutr.Sci.Vitaminol.(Tokyo),2007,53(1);43-7）的文章。该方法需要水解尿液样品，通过反相硅胶柱和薄层的色谱法纯化。该方法被应用于识别雌马酚生产者。

涉及雌马酚检测的早期研究发表于二十世纪四、五十年代。Dirscherl公开了一种用于在雌马尿液中颜色检测雌马酚的方法（1940,Physiol.Chem.,264,57-63）。在硝酸和样品水溶液交界处形成的红色环指示雌马酚的形成。其他方法有所公布，其中产生并溶解雌马酚沉淀或者其中在显微镜载玻片上产生固体并在显微镜下观察固体。在该文献中公开的方法需要化学试验室的设备或仪器如显微镜。

因此，用于检测雌马酚的本领域已知的问题是相对复杂的。它们或者需要精细和昂贵的仪器或者至少需要化学试验室的设备。进一步地，在测试过程中还使用潜在的危险性化学品，如硝酸或碘。

发明内容