[发明专利]无创产前诊断胎儿非整倍体性的方法和组合物

权利要求书

1.一种使用母体血液样品进行产前诊断胎儿非整倍体性的方法，所述方法包括：

a)在母体血液样品中，从低甲基化DNA中物理分离高甲基化DNA，而没有使所述低甲基化DNA或高甲基化DNA进行化学改变或酶消化，以获得高甲基化DNA样品；

b)在所述高甲基化DNA样品中，测定多个差异甲基化区域(DMR)的水平，以获得所述高甲基化DNA样品的高甲基化值；

c)将所述高甲基化DNA样品的所述高甲基化值与所述多个DMR的标准化参考高甲基化值进行比较；以及

d)基于所述比较诊断胎儿非整倍体性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述母体血液样品是母体外周血样品。

3.根据权利要求1所述的方法，其中高甲基化DNA通过甲基化DNA免疫沉淀(MeDiP)从低甲基化DNA中物理分离。

4.根据权利要求1所述的方法，其中在高甲基化DNA从低甲基化DNA中物理分离之后，对所述高甲基化DNA进行扩增。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述高甲基化DNA通过连接介导的聚合酶链反应(LM-PCR)扩增。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个DMR选自附录A-E中的列表。

7.根据权利要求1所述的方法，其中对于至少3个DMR，测定所述多个DMR的水平。

8.根据权利要求1所述的方法，其中对于至少5个DMR，测定所述多个DMR的水平。

9.根据权利要求1所述的方法，其中对于至少8个DMR，测定所述多个DMR的水平。

10.根据权利要求1所述的方法，其中对于至少10个DMR，测定所述多个DMR的水平。

11.根据权利要求7-10中任意一项所述的方法，其中所述多个DMR选自附录A-E中的列表。

12.根据权利要求1所述的方法，其中在所述高甲基化DNA样品中的所述多个DMR的水平通过实时定量聚合酶链反应(Real Time QPCR)测定。

13.根据权利要求5所述的方法，其中多个DMR的水平也在总未处理的母体血液DNA样品中测定作为LM-PCR效率的对照。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述高甲基化DNA样品的所述高甲基化值与正常母体血液DNA样品的标准化正常参考高甲基化值进行比较，并且当所述高甲基化DNA样品的所述高甲基化值高于所述正常母体血液DNA样品的标准化正常参考高甲基化值时，进行胎儿非整倍体性的诊断。

15.根据权利要求1所述的方法，其中对于三染色体21的诊断，所述多个DMR在染色体21上。

16.根据权利要求1所述的方法，其中在染色体21上的所述多个DMR包括选自以下的3个或多个区域：碱基对39279856-39280004(SEQ ID NO：33)，碱基对44161178-44161323(SEQ ID NO：34)，碱基对44161239-44161371(SEQ ID NO：35)，碱基对33320735-33320829(SEQ ID NO：36)，碱基对42189557-42189683(SEQ ID NO：37)，碱基对42355712-42355815(SEQ ID NO：38)，碱基对42357215-42357341(SEQ ID NO：39)，碱基对22403649-22403792(SEQ ID NO：40)，碱基对29136735-29136844(SEQ ID NO：41)，碱基对32268843-32268943(SEQ ID NO：42)，碱基对44079235-44079322(SEQ ID NO：43)，碱基对37841284-37841411(SEQ ID NO：44)，及其组合。