[发明专利]FRET测量方法及FRET测量装置

权利要求书

1.一种FRET测量方法，对于感受体和向心配合体结合、且设置有第一分子和第二分子的测量样品照射激光，由此测量能量从第一分子转移到第二分子的FRET（Fluorescence Resonance Energy Transfer：荧光共振能量转移），该方法包括下述步骤：

激光照射步骤，将对强度进行时间调制了的激光照射所述测量样品上；

测量步骤，测量被所述激光照射的所述测量样品所发出的荧光；

荧光寿命计算步骤，利用在所述测量步骤所测量的荧光信号计算出第一分子的荧光寿命；

结合比率计算步骤，利用在所述荧光寿命计算步骤所计算出的所述荧光寿命，计算出作为包含在所述测量样品中的所述感受体中发生FRET的感受体比率的结合比率；

结合条件设定步骤，设定所述测量样品的结合条件，使得所述结合比率不同；

解离常数计算步骤，计算出表示所述感受体和所述向心配合体的结合程度的解离常数；

其中，所述解离常数计算步骤利用最小二乘法将所述测量样品中的所述感受体的全体浓度和所述解离常数作为变量的函数通过向所述结合比率计算步骤中计算出的所述结合比率拟合来求出所述解离常数。

2.根据权利要求1所述FRET测量方法，其特征在于，当将所述结合比率表示为κ_FRET、包含在所述测量样品中的所述感受体的全体浓度表示为[R_o]、包含在所述测量样品中的所述向心配合体的全体浓度表示为[L_o]、所述解离常数表示为K_d时，

在所述解离常数计算步骤中，利用将[R_o]和K_d作为变量的二变量最小二乘法，并通过将下述式向κ_FRET和[L_o]拟合，由此求出所述解离常数K_d。

[数1]

κFRET=[L0]+[R0]+Kd-([L0]+[R0]+Kd)2-4[L0][R0]2[R0]]]>

3.根据权利要求1或2所述的FRET测量方法，其特征在于，在所述荧光寿命计算步骤中，利用在所述测量步骤所测量的荧光信号和对所述激光进行调制的调制信号的相位差，计算出第一分子的荧光寿命。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的FRET测量方法，其特征在于，在所述感受体中结合有第一分子和第二分子，在所述结合条件设定步骤中，通过向所述测量样品添加所述向心配合体，设定所述样品的结合条件，以使得所述结合比率不同。