[发明专利]使用稀脉萍的KODA 的制造方法

说明书

技术领域

本发明涉及具有以下的式(I)所示的结构的植物激素(通用名：9-羟基-10-氧代-顺式-12(Z),15(Z)-十八碳二烯酸，以下称为KODA)的制造方法。

背景技术

KODA作为具有植物花芽形成促进作用、植物激活作用及包含这些作用的植物生长调节作用的植物激素(日本特开平9-295908号公报、日本特开平11-29410号公报、日本特开2001-131006号公报、日本特开2009-17829号公报)已知。KODA已知存在于各种植物种中，且已知受到胁迫的稀脉萍(Lemna paucicostata)与其他植物相比释放出极高的水平(数百倍)的KODA。利用该性质，可使用由作为浮萍科植物的一种的稀脉萍提取得到的提取法来制造KODA。作为其他的制造方法，可使用以下方法制造KODA：通过使9位生成物特异性脂加氧酶(LOX)、丙二烯氧化物合酶(AOS)这样的酶，按照植物体内的脂肪酸代谢途径作用于作为不饱和脂肪酸的α-亚麻酸(通用名：顺式-9,12,15-十八碳三烯酸)而获得的酶法；以及通过运用通常公知的化学合成法来获得的化学合成法。这些制造方法在日本特开平11-29410号公报中公开。

KODA是具有植物生长调节作用的植物激素，因此期待在农业领域的使用。在农业领域使用时，与药品等领域不同，如果不能够以低成本进行大量生产，则不耐实用。

在使用α-亚麻酸作为起始物质的酶法中，如以下记载的那样，以α-亚麻酸作为底物，使9位生成物特异性脂加氧酶(LOX)作用，在9位导入氢过氧基(-OOH)，接着通过使丙二烯氧化物合酶(AOS)作用，从而制造KODA。

但是，9位生成物特异性脂加氧酶不能商业获得，由植物提取则材料的获得和/或处理非常费工夫，另外目前为止已知的9位生成物特异性脂加氧酶活性低。进而，目前为止得到的9位生成物特异性脂加氧酶的cDNA以大肠杆菌表达时，多为不溶性，难以大量获得显示活性的蛋白质。

丙二烯氧化物合酶是具有将氢过氧化的脂肪酸转换为丙二烯氧化物的活性的酶，丙二烯氧化物不稳定，因而非酶地转换为酮醇体。AOS是存在于植物、动物及酵母中，在植物中则存在于全部被子植物中的酶。但是，丙二烯氧化物合酶通常具有自杀底物的性质，提高底物的浓度时，反而导致生成量的减少。由于这些脂加氧酶、丙二烯氧化物合酶的缺点，酶法对于大量生产不合适。另一方面，通过化学合成法难以实现农业领域所需的低成本。

另一方面，在现有的提取法中，通过培养已知以高效率生产花芽诱导物质的稀脉萍441株来进行提取法，但即使在使用该株的情况下，所生产的KODA的量也不能说充分。因此，期望提供低成本且大量地制造KODA的方法。

发明内容

发明要解决的课题

本发明的目的在于提供在收量的方面被改良了的KODA的制造方法。

用于解决课题的方法

本发明者们为了解决上述课题而进行了深入研究，筛选了各种稀脉萍株，结果发现，与其他的稀脉萍株相比，稀脉萍SH株生产极高的水平的KODA。

发明的效果

根据上述的发现，本发明者们提供以下方法：在基于提取法的KODA的制造方法中通过将稀脉萍SH株作为起始物质，从而以高收量制造KODA的方法。

进而本发明者们着眼于作为KODA高生产株的稀脉萍SH株的代谢途径，在稀脉萍中以9位生成物特异性脂加氧酶的基因序列(序列号1)、以及丙二烯氧化物合酶的基因序列(序列号2)为首进行了鉴定。该序列号1及序列号2的碱基序列都是来自于稀脉萍SH株的序列。

因此本发明者们提供以下方法：在基于提取法的KODA的制造方法中，通过使用含有由包含序列号1和/或序列号2所示的序列的DNA、或与该DNA实际上相同的DNA组成的基因的稀脉萍株，从而以高的收量制造KODA的方法。

本发明进一步提供通过使用了以上记载的KODA高生产稀脉萍株的制造方法生产的KODA。

附图说明

图1是显示62种稀脉萍株的KODA生产量的图。

图2A是显示稀脉萍SH株的LOX基因的基因序列的图。

图2B是显示图2A的基因序列的继续的图。

图2C是显示图2B的基因序列的继续的图。

图3A是显示稀脉萍SH株的AOS基因的基因序列的图。