[发明专利]分离和纯化核酸的方法

权利要求书

1.一种从含核酸与污染物的生物样品分离和纯化核酸优选含DNA的方法，所述方法包括以下步骤：

1.混合样品和裂解缓冲液，所述裂解缓冲液含有阴离子表面活性剂源但基本不含螯合剂或络合剂，

2.孵育步骤1所得混合物以获得含有DNA、RNA和蛋白质的裂解物，

3.可选分解裂解物中存在的RNA，

4.从所述裂解物中去除表面活性剂离子，优选通过向所述裂解物添加含有碱金属单价离子和/或碱土金属二价离子，所述离子选自包含Rb⁺,Cs⁺,Ca²⁺,Sr²⁺,Ba²⁺或其混合物的组，优选选自Rb⁺,Cs⁺,Ca²⁺,Sr²⁺,Ba²⁺或其混合物组成的组，

5.将核酸与沉淀物和裂解物中的其它污染物分离，至少后者优选通过尺寸排阻色谱来获得经纯化的含核酸洗脱物。

2.一种含有缓冲物质、H₂SO₄和阴离子表面活性剂离子源的裂解缓冲液，其中所述缓冲液的pH为7.5～10，优选8～9，且最优选8.5，且优选基本不含EDTA与Mg²⁺离子。

3.如权利要求2所述的裂解缓冲液，其特征在于，还包含蛋白酶。

4.如权利要求2或3所述的裂解缓冲液，其特征在于，所述缓冲液中表面活性剂离子源的浓度为1～100mmol/L，优选5～75mmol/L，更优选10～50mmol/L，且最优选25mmol/L。

5.如权利要求2-4中任一项所述的裂解缓冲液，其特征在于，所述缓冲液中缓冲物质的浓度为1～100mmol/L，优选5～75mmol/L，更优选10～50mmol/L，且最优选25mmol/L。

6.如权利要求2-5中任一项所述的裂解缓冲液，其特征在于，所述缓冲物质对表面活性剂离子源的摩尔比为3:1～1:3，优选2:1～1:2，更优选1.2:1～1:1.2，且最优选1:1。

7.如权利要求2-6中任一项所述的裂解缓冲液，其特征在于，所述缓冲液中Cl^-离子的浓度低于10mmol/L，优选低于1mmol/L，更优选低于0.1mmol/L。

8.一种裂解含细胞生物样品中细胞的方法，所述方法包括以下步骤：

1.混合样品与权利要求2-7中任一项所述的裂解缓冲液，

2.孵育步骤1所得混合物以获得至少含有DNA、RNA和蛋白质的裂解物。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，还包括分解裂解物中所含RNA的步骤。

10.如权利要求1或9所述的方法，其特征在于，孵育混合物以获得裂解物的步骤和分解样品中RNA的步骤在单个步骤中通过将混合物加热至温度高于60°C来进行，优选加热至60°C～70°C，更优选61°C～65°C，且最优选加热至62°C。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述混合物被加热10～80分钟，优选15～60分钟，更优选20～50分钟，且最优选30～45分钟。

12.如权利要求1或8-11中任一项所述的方法，其特征在于，对于10mg样品组织的裂解，使用的裂解缓冲液体积为20～150μL，更优选30～120μL，更优选50～100μL，且最优选80μL。

13.如权利要求1或8-12中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品是含细胞的生物样品，优选选自包含新鲜或冷冻的组织、血液和革兰氏阴性菌的组。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述组织是哺乳动物组织，优选人的组织。

15.一种用于分离和纯化核酸试剂盒，所述核酸优选含基因组DNA，所述试剂盒包含：

1.权利要求2-7中任一项所述的裂解缓冲液，

2.碱金属单价离子和/或碱土金属二价离子的离子源，所述离子选自包含Rb⁺,Cs⁺,Ca²⁺,Sr²⁺,Ba²⁺或其混合物的组，优选选自Rb⁺,Cs⁺,Ca²⁺,Sr²⁺,Ba²⁺或其混合物组成的组，所述离子源的形式是待用户溶解的水溶性碱土金属盐，或是待用户稀释的母液或是即用型溶液，

3.可选有色谱装置，用于通过凝胶过滤色谱从污染物中纯化核酸优选基因组DNA，所述装置包含至少一个色谱单元，所述单元包含：(1)具有入口和出口的中空主体，所述中空主体包含提供尺寸排阻特性的固体基质，优选形成凝胶床；(2)置于出口与固体基质之间用以使固体基质保持在色谱单元内的多孔玻璃料、滤器、毛网或膜；(3)置于多孔玻璃料、滤器、毛网或膜与基质之间的无孔环，密封所述玻璃料、滤器、毛网或膜的外区以避免流动相进入玻璃料、滤器、毛网或膜而不经过基质；(4)可选有至少一个可移除的闭合装置以封闭色谱单元的入口和/或出口；和(5)可选有至少一个收集管以收集通过基质后的流动相(洗脱物)，其中所述固体基质是成凝胶聚合物，其尺寸排阻限度为150～500个碱基对，优选200～400碱基对，且最优选250～300碱基对，以及

4.可选的引物，用于直接扩增洗脱物中的一种或多种靶核酸。