[发明专利]无标记的定靶药理学方法

说明书

要求在先提交的美国申请的权益

本申请要求2010年3月19日提交的美国临时申请第61/315,653号的优先权，其内容通过引用纳入本文。

相关申请的交叉参考

2010年3月19日提交的名为METHODS FOR DETERMINING MOLECULAR PHARMACOLOGY USING LABEL-FREE INTEGRATIVE PHARMACOLOGY（使用无标记的整合药理学测定分子药理学的方法）美国临时申请号61/315625通过引用全文纳入本文。

背景

本发明涉及生物传感器，并且更特别涉及使用所述生物传感器来鉴定靶标和分子。本发明也涉及测定分子定靶（on-target）药理学和药物开发的方法。

发明内容

本公开提供无标记定靶药理学方案，和对分子进行系统生物学和系统药理学分析、以及药物开发的方法、组合物、制品和机器。本发明也提供联用多个试验模式与无标记细胞整合药理学方案以测定分子定靶药理学的方法。

附图说明

图1A-1H显示本发明方法怎样使用无标记定靶药理学方案来测定β2肾上腺素能受体激动剂沙丁胺醇的定靶药理学。所述定靶药理学方法使用试验模式组来生成无标记生物传感器输出信号方面的多个药物药理学描述。

图1A显示静息A431细胞响应沙丁胺醇持续刺激的DMR信号。这是持续刺激试验。

图1B显示没有（DMSO-普萘洛尔）和用沙丁胺醇预处理（沙丁胺醇-普萘洛尔）的静息A431细胞的普萘洛尔DMR信号。这是顺序刺激试验。

图1C显示在没有沙丁胺醇（毛喉素）和有沙丁胺醇（毛喉素+沙丁胺醇）下静息A431细胞响应毛喉素的DMR信号。这是共刺激试验。

图1D显示经肾上腺素预处理A431细胞的沙丁胺醇DMR信号。这是反向顺序刺激试验，其中用所述受体的内源性激动剂预刺激所述细胞。

图1E显示没有TBB（DMSO-沙丁胺醇）和有TBB（TBB-沙丁胺醇）预处理的静息A431细胞的沙丁胺醇DMR信号。这是顺序刺激试验。

图1F显示没有百日咳毒素（DMSO-沙丁胺醇）和有百日咳毒素（PTX-沙丁胺醇）预处理的A431细胞的沙丁胺醇DMR信号。此处百日咳毒素处理过夜来预调理所述细胞。

图1G显示没有沙丁胺醇（DMSO-肾上腺素）和有沙丁胺醇（沙丁胺醇-肾上腺素）的静息A431细胞的肾上腺素DMR信号。这是经典顺序拮抗剂试验，其中所述细胞预先暴露于分子，然后用内源性β2AR激动剂肾上腺素刺激。

图1H显示A431细胞中对下述4个标记组的沙丁胺醇DMR调节指数：2nM肾上腺素、1μM组胺、32nM表皮生长因子和1μM烟酸。图1A-1H所示的所有实验中，沙丁胺醇的浓度是10μM。

图2显示根据包含所示定靶药理学方案的本发明方法，已知肾上腺素能受体药物分子聚类的热图。所述热图用一维相似性分析制成。对调节百分比计算而言，就每个标记诱导DMR信号使用一种或两种DMR事件。对其他试验而言，由5个时域（time domain）响应组成的同一数字矩阵用于描述分子反应。所述5个时域响应是刺激后3分钟、5分钟、9分钟、15分钟和50分钟的DMR信号的真实值。对所述β肾上腺素能药而言，显然次聚类大部分由具有几乎同一治疗适应症的药物分子组成。

具体实施方式

下面详细描述本发明的各种实施方式；若有附图，则参考附图描述。参考各种实施方式不限制本发明的范围，本发明范围仅受所附权利要求书的范围的限制。此外，在本说明书中列出的任何实施例都不意在构成限制，而仅是列出要求权利的本发明的许多可能实施方式中的一些。