[发明专利]用于在酵母细胞表面上展示多肽的方法和组合物

权利要求书

1.一种表达盒，其包含：

与融合序列可操作连接的启动子，所述融合序列包含与第二核酸序列以符合读码框的方式融合的第一核酸序列，所述第一核酸序列包含编码锚多肽的核苷酸序列，所述第二核酸序列包含编码抗体多肽或抗体多肽片段的核苷酸序列。

2.一种表达盒，其包含：

与第一核酸序列可操作连接的启动子，所述第一核酸序列包含编码锚多肽的锚核苷酸序列，其中所述第一核酸序列可以在融合多肽中作为第一融合配偶体表达，所述融合多肽包含由第二核酸序列编码的感兴趣的第二融合配偶体。

3.权利要求2的表达盒，其进一步包含编码所述感兴趣的第二融合配偶体的第二核酸序列。

4.权利要求3的表达盒，其进一步包含整个或部分的限制性位点。

5.权利要求3的表达盒，其中所述感兴趣的第二融合配偶体包含抗体多肽或抗体多肽片段。

6.权利要求1或权利要求5的表达盒，其中所述抗体多肽片段是scFv片段。

7.权利要求1或权利要求5的表达盒，其中所述抗体多肽片段是Fab片段的重链。

8.权利要求1的表达盒载体，其中所述抗体多肽片段是Fab片段的轻链。

9.权利要求1或3-8中任一项的表达盒，其中在所述第二核酸序列3’融合所述第一核酸序列，使得自所述融合序列生成的融合多肽包含N端抗体多肽或抗体多肽片段和C端锚多肽。

10.权利要求1-8的表达盒，其中在所述第二核酸序列5’融合所述第一核酸序列，使得自所述融合序列生成的融合多肽包含N端锚多肽和C端抗体多肽或抗体多肽片段。

11.前述权利要求中任一项的表达盒，其中所述启动子是组成性的。

12.前述权利要求中任一项的表达盒，其中所述启动子是诱导型的。

13.权利要求12的表达盒，其中所述启动子是POX2或LIP2启动子。

14.前述权利要求中任一项的表达盒，其中所述启动子是半组成性的。

15.权利要求14的表达盒，其中所述启动子是hp4d启动子。

16.前述权利要求中任一项的表达盒，其进一步包含前导核酸序列，所述前导核酸序列包含编码前导多肽的核苷酸序列，其中在所述第一和第二核酸序列5’以符合读码框的方式融合所述前导核酸序列。

17.权利要求16的表达盒，其中所述前导多肽选自下组：前LIP2、前原LIP2、前XPR2、和前原XPR2。

18.前述权利要求中任一项的表达盒，其进一步包含接头核酸序列，所述接头核酸序列包含编码接头多肽的核苷酸序列。

19.权利要求18的表达盒，其中所述接头核酸序列在所述第一和第二核酸序列间以符合读码框的方式融合。

20.权利要求18的表达盒，其中所述抗体多肽包含scFv抗体多肽，且其中所述接头核酸序列在编码所述scFv多肽的可变区的重链核酸序列和编码可变区的轻链核酸序列间以符合读码框的方式融合。

21.权利要求18-20中任一项的表达盒，其中所述接头多肽包含(Gly₄Ser)₃(SEQ ID NO:14)或(GlySer)₅(SEQ ID NO:15)。

22.前述权利要求中任一项的表达盒，其进一步包含一种或多种核酸序列，所述一种或多种核酸序列包含编码一种或多种表位标签的核苷酸序列。

23.权利要求22的表达盒，其中所述一种或多种表位标签选自下组：c-Myc、V5、六组氨酸、谷胱甘肽-S-转移酶、链霉亲合素、生物素、血凝素、Flag标签、和E标签。

24.前述权利要求中任一项的表达盒，其中所述锚多肽选自下组：Aga1p多肽或其片段、Aga2p多肽或其片段、和Sag1p多肽或其片段。

25.前述权利要求中任一项的表达盒，其中所述抗体多肽或抗体多肽片段、所述锚多肽、或这两者经密码子优化以在耶氏酵母属细胞中表达。