[发明专利]在经遗传修饰的生物体中切除转基因

权利要求书

1.一种用于删除植物中的DNA区的方法，该方法包括：

提供含有基因组DNA的能活植物，该基因组DNA包含所述DNA区；并

在含有所述基因组DNA的所述能活植物中导入或表达锌指核酸酶，其中将所述锌指核酸酶工程化改造为在识别序列处切割所述基因组DNA；

其中所述方法导致在识别序列处对所述基因组DNA的切割，而且导致所述基因组DNA的切除，其中所述DNA区不存在于所述基因组DNA。

2.通过权利要求1的方法生成的转基因植物。

3.一种用于删除植物中的DNA区的方法，该方法包括：

提供含有基因组DNA的第一能活植物，所述基因组DNA包含所述DNA区及在所述DNA区的3’端侧翼的第一识别序列和在5’端侧翼的第二识别序列；

提供含有基因组DNA的第二能活植物，所述基因组DNA包含编码工程化改造为在所述识别序列处切割所述基因组DNA的锌指核酸酶的DNA;

将所述第一和第二能活植物杂交，使得在所述第一或所述第二能活植物上生成F1种子；并

种植含有基因组DNA的所得F1植物，其中所述DNA区不存在于所述基因组DNA。

4.权利要求3的方法，其中所述第一识别序列和所述第二识别序列是相同的。

5.由权利要求3的方法生成的转基因植物。

6.一种分离的核酸分子，其包含：

由锌指核酸酶识别的第一核酸序列；

感兴趣的基因；和

由锌指核酸酶识别的第二核酸序列，其中所述感兴趣的基因侧翼有由锌指核酸酶识别的所述第一和第二核酸序列。

7.权利要求6的分离的核酸分子，其进一步包含与所述感兴趣的基因可操作连接的启动子。

8.权利要求6的分离的核酸分子，其中所述第一核酸序列和所述第二核酸序列侧翼有同源序列。

9.一种生成转基因植物的方法，包括：

用权利要求1的分离的核酸分子转化植物细胞或植物组织；并

再生全植物。

10.由权利要求9的方法生成的转基因植物。

11.一种分离的核酸分子，其包含：

启动子；和

编码锌指核酸酶的核酸序列，其中所述启动子与所述编码锌指核酸酶的核酸序列可操作连接，其中所述核酸序列侧翼有锌指核酸酶切割位点。

12.一种生成转基因植物的方法，包括：

用权利要求11的分离的核酸分子转化植物细胞或植物组织；并

再生全植物。

13.权利要求11的分离的核酸分子，其中所述启动子选自下组：花粉特异性启动子、种子特异性启动子和发育阶段特异性启动子。

14.一种切除植物中感兴趣的基因的方法，包括：

将权利要求9的植物与权利要求11的植物杂交，其中源自所述杂交的后代展现出锌指核酸酶介导的感兴趣基因的切除。

15.一种用于降低感兴趣的基因对其它植物的传播的方法，包括：

将权利要求9的植物与自用分离的核酸分子转化的植物细胞或组织再生的植物杂交，所述分离的核酸分子包含与锌指核酸酶可操作连接的花粉特异性启动子，其中在源自所述杂交的后代的花粉中特异性切除所述感兴趣的基因，并切除天然的感兴趣基因；并

栽培源自所述杂交的后代。

16.一种切除植物中感兴趣的天然基因的方法，包括：

用包含编码锌指核酸酶的核酸序列的分离的核酸分子或编码锌指核酸酶的分离的蛋白质序列转化包含感兴趣的基因的植物细胞或组织，其中所述锌指核酸酶识别在所述感兴趣的天然基因侧翼的核酸序列；并

再生全植物。

17.一种用于在含有核酸分子的植物中删除DNA区的方法，包括：

提供由锌指核酸酶识别的第一核酸序列；

提供选择标志基因表达盒；并

提供由锌指核酸酶识别的第二核酸序列，其中所述选择标志侧翼有由锌指核酸酶识别的所述第一和第二核酸序列。

18.权利要求17的方法，其中所述第一核酸序列和所述第二核酸序列侧翼有同源序列。