[发明专利]能够识别血凝素干区上的杂亚型中和表位的IgG同种型全长免疫球蛋白和其作为抗-流感药物的应用

说明书

本发明总体属于免疫学领域。更具体地，本发明涉及能够结合并中和A型流感病毒的全长免疫球蛋白。

现有技术中已知针对A型流感病毒的抗体。

国际专利申请PCT/IB2009/051068描述了能够结合多个不同A型流感亚型（杂亚型免疫性（heterosubtypic immunity））的单克隆抗体，优选为Fab片段，这种抗体进一步被赋予重要的中和活性。以上提到的国际专利申请中描述的优选抗体是Fab 28片段，特征在于其包括含氨基酸序列SEQ ID NO:1的重链可变区和含氨基酸序列SEQ ID NO:2的轻链可变区。在PCT/IB2009/051068中也描述了各自的编码核苷酸序列，即SEQ ID NO:3（重链可变区）和SEQ ID NO:4（轻链可变区）。在该说明书中，将抗体片段Fab 28指定为“Fab PN-SIA28”。

在国际专利申请PCT/IB2009/051068中，作者提到发明的抗体对象可以可替换地作为与Fab片段相对的全长免疫球蛋白提供。已知，人的免疫球蛋白分为重链类型不同的5个主要类别：IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。但是，在PCT/IB2009/051068中，未单独鉴别特定免疫球蛋白类型，并且未提供如允许本领域技术人员选择特定免疫球蛋白类型的关于重链类型的建议。

此外，在PCT/IB2009/051068中，未提供关于PN-SIA28用作全长免疫球蛋白时的中和效果的实验数据。惊人地，本发明的发明人现在已发现PCT/IB2009/051068中所述的由重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列表征的单克隆抗体，尤其作为全长IgG类免疫球蛋白提供，与相应Fab片段相比，在能力和作用范围两方面，表现出对甲型流感病毒显著增加的中和活性。

已知，IgG由一对轻链（L）和一对重链（C）组成。每条轻链包含两个免疫球蛋白域，一个可变（VL）域一个恒定（CL）域。重链为γ型且每条重链包含一个可变免疫球蛋白域（VH或Vγ）和三个恒定域（CH1/2/3）。γ链又可分为四个不同的亚型，分别指定为γ1、γ2、γ3和γ4。

在PCT/IB2009/051068中所述的由重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列表征的作为全长IgG的单克隆抗体在下文中指定为“IgG PN-SIA28”。

表1示意性地示出了由本发明的发明人获得的以对比表达的关于IgGPN-SIA28的中和活性的结果。

对H3N2亚型的不同株存在显著的高中和活性的证据，而其在相应的Fab片段的情况中较低。

此外，即使在极低的浓度，全长IgG对H1N1亚型的不同株表现出非常强的中和活性，高于相应Fab片段对相同的H1N1株。本发明的发明人还进行了允许评估IgG PN-SIA28也结合属于亚型H2、H5和H9的重组血凝素能力的初步实验。在实验部分中详细地描述的获得的结果允许认为IgG PN-SIA28的中和活性至少扩展至H2、H5和H9亚型，当涉及相应的Fab片段时以前没有描述该中和活性。

给定IgG PN-SIA28特别的中和性，本发明的发明人还进行了允许它们鉴别构成尤其由中和抗体IgG PN-SIA28识别的表位的血凝素区的特别复杂的研究和实验（在下文中详细说明）。由IgG PN-SIA28识别的中和表位的鉴别是非常有用和重要的，使得可以进一步鉴别针对相同表位和赋予与IgG PN-SIA28实质可比的特别的中和性质的人单克隆抗体。

因此，本发明的一个第一目的是全长IgG形式的，尤其针对A型流感病毒血红素抗原和能够结合并中和至少包括H1亚型和H3亚型的多种A型流感病毒亚型的人单克隆抗体，其特征在于抗体识别位于血凝素干区（stem region）的保守表位，所述表位包含HA1血凝素多肽的氨基酸残基His25、His45、Thr315和Asn336以及HA2血凝素多肽的氨基酸残基Thr358、Met360、Ile361或Val361、Asp362、Gly363、Trp364、Yhr384、Thr392、Val395、Glu400，氨基酸残基的编号是基于可在NCBI数据库中获得的在登录号EF467821.1的和在序列表中指定为SEQ ID NO:5的H1N1血凝素氨基酸序列。