[发明专利]双特异性抗体

权利要求书

1.双特异性抗体，包含：

a)特异性结合第一个抗原的第一个全长抗体的重链和轻链；

b)特异性结合第二个抗原的第二个全长抗体的重链和轻链，其中重链的N端通过多肽接头连接到轻链的C端。

2.根据权利要求1的抗体，其特征在于：

a)的全长抗体的重链的CH3结构域和b)的全长抗体的重链的CH3结构域各自在包含抗体CH3结构域之间的原界面中的改变的界面处交汇；

其中，i)在一条重链的CH3结构域

氨基酸残基被具有较大侧链体积的氨基酸残基取代，从而在一条重链的CH3结构域的界面内生成凸起，该凸起可置于另一条重链的CH3结构域的界面内的腔中

并且其中

ii)在另一条重链的CH3结构域中

氨基酸残基被具有较小侧链体积的氨基酸残基取代，从而在第二个CH3结构域的界面内生成腔，第一个CH3结构域的界面内的凸起可置于该腔中。

3.根据权利要求2的抗体，其特征在于：

所述具有较大侧链体积的氨基酸残基选自精氨酸（R）、苯丙氨酸（F）、酪氨酸（Y）、色氨酸（W）和

所述具有较小侧链体积的氨基酸残基选自丙氨酸（A）、丝氨酸（S）、苏氨酸（T）、缬氨酸（V）。

4.根据权利要求2至3的抗体，其特征在于：

通过引入半胱氨酸（C）作为每个CH3结构域对应位置的氨基酸，两个CH3结构域都被进一步改变，使得两个CH3结构域之间能形成二硫桥。

5.根据权利要求1至4的抗体，其特征在于：

b)的第二个全长抗体的重链和轻链的抗体重链可变结构域(VH)和抗体轻链可变结构域(VL)是通过在以下位置之间引入二硫键，由二硫化物稳定的：

i)重链可变结构域第44位至轻链可变结构域第100位，

ii)重链可变结构域第105位至轻链可变结构域第43位，或

iii)重链可变结构域第101位至轻链可变结构域第100位。

6.根据权利要求1至5的双特异性抗体，其中抗体包含IgG1的恒定区。

7.根据权利要求1的双特异性抗体，其特征在于：

a)第一个全长抗体特异性地结合IGF-1R并包含具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链，和具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链，并且

b)第二个全长抗体特异性地结合EGFR并包含通过肽接头与轻链连接的重链，其中所述肽连接的重链和轻链具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列。

8.根据权利要求1的双特异性抗体，其特征在于：

a)第一个全长抗体特异性地结合IGF-1R并包含具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链，和具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链，并且

b)第二个全长抗体特异性地结合EGFR并包含通过肽接头与轻链连接的重链，其中所述肽连接的重链和轻链具有SEQ ID NO：4的氨基酸序列。

9.根据权利要求1的双特异性抗体，其特征在于：

a)第一个全长抗体特异性地结合EGFR并包含具有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的重链，和具有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的轻链，并且

b)第二个全长抗体特异性地结合IGF-1R并包含通过肽接头与轻链连接的重链，其中所述肽连接的重链和轻链具有SEQ ID NO：7的氨基酸序列。

10.根据权利要求1的双特异性抗体，其特征在于：

a)第一个全长抗体特异性地结合EGFR并包含具有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的重链，和具有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的轻链，并且

b)第二个全长抗体特异性地结合IGF-1R并包含通过肽接头与轻链连接的重链，其中所述肽连接的重链和轻链具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列。

11.根据权利要求1的双特异性抗体，其特征在于：

a)第一个全长抗体特异性地结合VEGF并包含具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链，和具有SEQ ID NO：10的氨基酸序列的轻链，并且

b)第二个全长抗体特异性地结合ANG-2并包含通过肽接头与轻链连接的重链，其中所述连接的重链和轻链具有SEQ ID NO：11的氨基酸序列。