[发明专利]利用烯酸还原酶还原肉桂醛衍生物的方法

权利要求书

1.用于产生通式I的醛化合物的酶促催化方法

其中R¹和R²彼此独立地代表线性的或者分枝的、任选被取代的烷基、烯基、炔基、烷氧基、烯氧基；-H、-OH、-SH、-卤素、-NH₂或者-NO₂;或者R¹和R²一起代表通式–O-R⁴-O-的基团，其中R⁴代表任选地被取代的亚烷基或亚烯基；并且R³代表H，烷基或者烷氧基；

所述方法包括:

a)在水性反应介质中酶促还原通式II的化合物，

其中

R¹,R²和R³如上面定义，

所述水性反应介质包含作为共溶剂的通式III的至少一种醚化合物

R⁵-O-R⁶(III)

其中

R⁵和R⁶彼此独立地代表线性的或者分枝的烷基;并且所述水性反应介质还含有至少一种还原酶和至少一种辅因子；

和

b)任选地以基本上纯的立体异构体或者立体异构体的混合物的形式分离通式I的所述化合物。

2.权利要求1的方法，其中所述共溶剂选自通式IV的不对称醚化合物，其中R⁵和R⁶是不同的。

3.权利要求2的方法，其中所述共溶剂选自通式IV的不对称醚化合物，其中残基R⁵和R⁶的一种或者两种是分枝的烷基。

4.权利要求3的方法，其中所述共溶剂是叔-丁基烷基醚，特别是叔-丁基甲醚。

5.前面权利要求的一项的方法，其中所述共溶剂在反应介质中以0.1至80，例如1至50、5至40或者10至30体积%的比例存在。

6.前面权利要求的一项的方法，其中所述还原酶选自以下酶组成的组：

a)OYE1，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者包含与所述SEQID NO:1有至少50%同一性的序列；

b)OYE2，其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，或者包含与所述SEQID NO:2有至少50%同一性的序列；

c)OYE3，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，或者包含与所述SEQID NO:3有至少50%同一性的序列；

d)OPR1，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，或者包含与所述SEQID NO:4有至少50%同一性的序列；

e)OPR3，其包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，或者包含与所述SEQID NO:5有至少50%同一性的序列；

f)NCR，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，或者包含与所述SEQ IDNO:7有至少50%同一性的序列；或者

g)YqjM，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，或者包含与所述SEQID NO:6有至少50%同一性的序列。

7.前面权利要求的一项的方法，其中所述反应在NADH或NADPH作为辅因子的存在下进行。

8.前面权利要求的一项的方法，其中所述还原反应被偶联到辅因子再循环反应，特别是酶促辅因子再循环反应。

9.权利要求8的方法，其中氧化的辅因子NAD通过偶联到葡糖脱氢酶催化的葡萄糖氧化被再循环（形成葡糖酸内酯和再生NADH）。

10.前面权利要求的一项的方法，其中所述涉及的酶以溶解的、分散的或者固定的形式存在于反应介质中。

11.前面权利要求的一项的方法，其中所述反应介质被缓冲到6.5至8.5的范围内的pH。

12.前面权利要求的一项的方法，其中所述反应温度是在10至50℃的范围内，特别是20至40℃。