[发明专利]甘油磷脂的稳定化方法及使用该方法的试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗磷脂抗体等被测物的免疫测定试剂及该试剂中所使用的使甘油磷脂稳定化的方法。

背景技术

抗磷脂抗体因下面二种疾病而在生物体内产生。一种是在感染了梅毒的病原体即梅毒螺旋体（Treponema Pallidum）的情况下，另一种是在一种叫抗磷脂抗体综合征的自身免疫疾病发病的情况下。

任何抗磷脂抗体均为针对以磷脂类中的心磷脂为主要成分的磷脂抗原而产生的抗体，其诊断中所使用的检查试剂含有心磷脂。

目前，作为使用上述磷脂的梅毒检查方法，正在使用的有以碳或高岭土粉末为载体的VDRL（性病研究实验室）法、RPR（快速血迹反应素）卡片试验法（非专利文献1）、以由聚苯乙烯共聚物等形成的乳胶为载体、用生化自动分析仪进行测定的乳胶凝集法（专利文献1）等。

另一方面，作为磷脂抗体综合征的检查方法，用ELISA法进行测定（专利文献2）。

作为用这些检查方法测定的检体，使用血清、血浆、脑脊液等。

专利文献

专利文献1：日本特开平7-103980号公报

专利文献2：日本特开平6-148193号公报

专利文献3：日本特开平10-282096号公报

非专利文献

非专利文献1：Public Health Reports Vol.75（1960），985-988

发明内容

一般情况下，通过对用抗原抗体反应进行的免疫凝集反应进行光学测定来诊断是否患有疾病的试剂有时会受到检体中的干扰成分的影响，测定值出现不规则降低。这种现象通过将被测物添加到生理盐水、缓冲液等不受检体中的干扰成分影响的溶液中时和在含有血清及血浆等干扰成分时测定值会有很大不同而变得明显。

作为由发生这种现象所引发的问题，可以列举以下两点。

（1）检体中的抗体量或抗原量少时，存在由于干扰成分的影响，免疫凝集反应不充分，虽然罹患疾病，但仍漏检的可能性。

（2）为了测定含有测定试剂的测定范围以上的抗体量或抗原量的检体的准确的抗体量或抗原量，通常用生理盐水或血清等对该检体进行稀释，使抗体量或抗原量减少至测定范围内进行测定，之后乘以稀释倍数，算出准确的抗体量或抗原量。然而，由于生理盐水中不含上述干扰成分，用不含抗体的血清对检体进行稀释时和用生理盐水进行稀释时的测定结果会背离，不能准确测定抗体量或抗原量。

为了弄清这种血清、血浆中的干扰成分，本发明者进行了研究，结果发现，该干扰成分为内源性脂蛋白。进一步研究发现，只要向免疫反应的反应系中添加甘油磷脂即可回避该内源性脂蛋白对测定值的影响，可以更准确地测出检体中的抗体或抗原。

通常，在测定抗磷脂抗体时，作为致敏剂而添加水溶性高分子，然而，已经发现，在试剂含有甘油磷脂的情况下，若添加一般使用的聚乙二醇等，则长期保存稳定性会出现问题。

因此，本发明的课题在于提供一种使用甘油磷脂、用于准确稳定的免疫测定的试剂及其稳定化方法。

因此，为了使使用甘油磷脂的免疫测定用试剂兼具稳定性和准确的测定值，本发明者做了各种研究，结果发现，未能通过添加聚乙二醇、普鲁兰多糖、含2－甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱的聚合物等而解决的长期保存稳定性在添加聚乙烯吡咯烷酮后得到显著改善，且可以准确测定被测物，由此完成了本发明。

即，本发明具有以下构成。

（1）一种试剂，其中，被测物为血中的抗体或抗原，在被测物为抗体时通过与抗原的免疫反应、在被测物为抗原时通过与抗体的免疫反应来测定被测物，其特征在于，在免疫反应的反应系中添加甘油磷脂及聚乙烯吡咯烷酮。

（2）（1）所述的试剂，其中，甘油磷脂为选自磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺及磷脂酰丝氨酸中的一种以上。

（3）（1）或（2）所述的试剂，其中，被测物为抗磷脂抗体，通过与磷脂抗原的免疫反应来测定前述抗体。

（4）（3）所述的试剂，其中，磷脂抗原负载在不溶性载体上。

（5）（3）或（4）所述的试剂，其中，被测物抗磷脂抗体为因梅毒感染而在血中出现的抗梅毒磷脂抗体。

（6）（3）或（4）所述的试剂，其中，被测物抗磷脂抗体为因自身免疫疾病抗磷脂抗体综合征而在血中出现的抗磷脂抗体。

（7）一种测定方法，其中，被测物为血中的抗体或抗原，在被测物为抗体时通过与抗原的免疫反应、在被测物为抗原时通过与抗体的免疫反应来测定被测物，其特征在于，在免疫反应的反应系中添加甘油磷脂及聚乙烯吡咯烷酮。