[发明专利]不溶性目标蛋白质的分离

权利要求书

1.从完整或破碎宿主细胞悬液中纯化不溶性目标丝蛋白的方法，其包括以下步骤：

a)提供包含不溶性目标丝蛋白和不溶性宿主细胞部分的完整或破碎宿主细胞悬液，

b)将至少一种碱的水溶液添加至所述悬液中，其中所述碱的量足以破碎所述宿主细胞和/或溶解所述不溶性宿主细胞部分，以及

c)将所述不溶性目标丝蛋白从所述溶解的不溶性宿主细胞部分中纯化出来，

其中在步骤b)中至少80％的所述不溶性宿主细胞部分被溶解，

其中所述不溶性目标丝蛋白在整个纯化过程中保持不溶，并且

其中所述至少一种碱是金属氢氧化物或氨。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞为细菌、酵母、植物或昆虫宿主细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述经纯化的不溶性目标丝蛋白的纯度为至少80％。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述经纯化的不溶性目标丝蛋白的纯度为至少90％。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述经纯化的不溶性目标丝蛋白的纯度为至少95％。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述金属氢氧化物选自氢氧化钠(NaOH)、氢氧化钾(KOH)和氢氧化钙(Ca(OH)₂)，或其组合。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述碱为氢氧化钠(NaOH)。

8.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(b)中所述碱的最终浓度为0.005M至1M。

9.根据权利要求8所述的方法，其中步骤(b)中所述碱的最终浓度为0.01M至0.6M。

10.根据权利要求9所述的方法，其中步骤(b)中所述碱的最终浓度为0.02M至0.2M。

11.根据权利要求10所述的方法，其中步骤(b)中所述碱的最终浓度为0.04M至0.06M。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括在步骤b)之前、步骤b)中和/或步骤b)之后添加至少一种试剂(i)。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述试剂选自变性剂、kosmotropic剂和去污剂，或其组合。

14.根据权利要求13所述的方法，其中

(i)所述变性剂为尿素(CH₄N₂O)或盐酸胍(CH₅N₃HCl)，

(ii)所述kosmotropic剂为磷酸盐或硫酸盐，或者

(iii)所述去污剂为吐温20、Triton X-100、SDS或Brij。

15.根据权利要求14所述的方法，其中

(i)所述尿素的最终浓度为0.1M至10M，或者

(ii)所述盐酸胍的最终浓度为0.01M至3M。

16.根据权利要求14所述的方法，其中

(i)所述尿素的最终浓度为1M至5M，或者

(ii)所述盐酸胍的最终浓度为0.1M至2M。

17.根据权利要求1所述的方法，其中步骤c)中所述不溶性目标丝蛋白与所述溶解的不溶性宿主细胞部分的所述分离通过离心、沉降和/或过滤来实现。

18.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括步骤b)之后和步骤c)之前的步骤b’)，其使所述悬液进行均化。

19.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤还包括步骤c)之后的步骤d)，其用水溶液、有机溶液和/或尿素洗涤所述经纯化的不溶性目标丝蛋白。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述有机溶液包含乙醇(EtOH)、甲醇(CH₃OH)、己烷(C₆H₁₄)、乙醚(C₄H₁₀O)和/或异丙醇(C₃H₈O)。