[发明专利]药理学诱导的转基因消融系统

权利要求书

1.一种适用于人对象的复制缺陷型病毒组合物，其中所述病毒基因组包括：

(a)第一转录单元，其编码与控制转录的启动子操作性连接的基因产物，所述第一转录单元包含消融识别位点；和

(b)第二转录单元，其编码与启动子操作性连接的对消融识别位点特异的消融因子，其中所述转录和/或消融活性受控于药理学试剂。

2.如权利要求1所述的复制缺陷型病毒组合物，其特征在于，所述第一转录单元包含多于一个消融识别位点。

3.如权利要求1所述的复制缺陷型病毒复合物，其特征在于，所述基因组包含多于一个消融识别位点，所述多于一个消融识别位点包含第一消融识别位点和不同于所述第一消融识别位点的第二个消融识别位点，所述病毒还包含对所述第一消融识别位点特异的第一消融因子和对所述第二识别位点特异的第二消融因子。

4.如权利要求1所述的复制缺陷型病毒组合物，其特征在于，所述消融因子的转录受到调节型系统控制。

5.如权利要求4所述的复制缺陷型病毒组合物，其特征在于，所述调节型系统可选自tet-on/off系统、tetR-KRAB系统、米非司酮(RU486)调节型系统、他莫昔芬-依赖性调节型系统、雷帕霉素-调节型系统或基于蜕皮激素的调节型系统。

6.如权利要求1-5中任一所述的复制缺陷型病毒组合物，其特征在于，所述消融因子选自下组：结合所述第一转录单元中的消融识别位点并剪切或消融DNA的内切核酸酶、重组酶、大范围核酸酶或锌指内切核酸酶，以及消融所述第一转录单元中RNA转录物或抑制所述第一转录单元中RNA转录物翻译的干扰RNA、核酶、或反义物。

7.如权利要求1所述的复制缺陷型病毒组合物，其特征在于，所述消融因子是Cre且所述消融识别位点是loxP，或者消融因子是FLP且所述消融识别位点是FRT。

8.如权利要求1所述的复制缺陷型组合物，其特征在于，所述消融因子是嵌合的经工程改造的内切核酸酶，其中所述病毒组合物包括(i)含与第一药理学试剂的结合域融合的内切核酸酶的DNA结合域的第一序列；并且其中所述病毒组合物还包含(ii)编码与所述第一药理学试剂的结合域融合的内切核酸酶的核酸酶切割结构域的第二序列，其中所述第一序列(i)和所述第二序列(ii)各与至少一种控制其表达的启动子操作性连接。

9.如权利要求8所述的复制缺陷型病毒组合物，其特征在于，所述嵌合的经工程改造的内切核酸酶可包含在所述第二转录单元的单个双顺反子开放阅读框内，所述转录单元还包括(i)和(ii)之间的接头。

10.如权利要求8所述的复制缺陷型病毒，其特征在于，所述序列(i)和/或序列(ii)具有诱导型启动子。

11.如权利要求8所述的复制缺陷型病毒组合物，其特征在于，所述嵌合的经工程改造的内切核酸酶包含在分离的开放阅读框内。

12.如权利要求8所述的复制缺陷型病毒组合物，其特征在于，所述第一序列和第二序列各在组成型启动子的控制之下，并且所述消融因子被所述第一种药理学试剂生物活化。

13.如权利要求1-12中任一所述的复制缺陷型病毒组合物，其特征在于，所述消融因子的编码序列还包含位于消融因子编码序列5’或3’的核定位信号。

14.如权利要求8-13中任一所述的复制缺陷型病毒组合物，其特征在于，所述DNA结合域选自下组：锌指、螺旋-转角-螺旋、HMG-盒、Stat蛋白、B3、螺旋-环-螺旋、翼状螺旋-转角-螺旋、亮氨酸拉链、翼状螺旋、POU结构域和同源结构域。

15.如权利要求8-13中任一所述的复制缺陷型病毒组合物，其特征在于，所述内切核酸酶选自下组：II型限制性内切核酸酶，内含子内切核酸酶和丝氨酸或酪氨酸重组酶。

16.如权利要求15所述的复制缺陷型病毒组合物，其特征在于，所述消融因子是嵌合FokI酶。