[发明专利]利用人类白血球抗原(HLA)筛检预测药物不良反应的方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请主张于2010年4月12日递交的美国临时申请No.61/323,067的优先权。在此通过整体引用该在先申请将其内容结合到本申请中。

发明背景

不良药物反应(ADR)仍为临床上及制药工业的主要问题。在许多ADR类型中，以史蒂生-琼森症候群(Stevens-Johnson syndrome，SJS)、中毒性表皮坏死溶解(TEN)及过敏症候群(HSS)最严重且危及生命，其中，SJS及TEN有10-50%的死亡率。参看Roujeau等人，New Engl.J.Med.333:1600-1607(1995)。尽管SJS/TEN/HSS的发病率低，但这些病状可能会造成个死亡或导致严重残疾。对于制药工业而言，发生严重药物过敏是非常不利的；目前有部分的新药因为会造成严重药物不良反应，而招致药品退市的命运。参看www.fda.gov/safety/recalls/default.htm。

已发现某些I型人类白血球抗原(HLA)对偶基因(例如HLA-A及HLA-B对偶基因)及某些II型HLA对偶基因(例如HLA-DR对偶基因)与ADR有关。参看Hung等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.102:4134-4139(2005)；Daly等人，Nat.Genet.41:816-819(2009)；Hautekeete,Gastroenterology 117(5):1181-6(1999)；及Dettling M,Pharmacogenomics J.7(5):325-32(2007)。所有这些ADR-HLA对偶基因的关联性，是在测定罹患核准上市药物诱发ADR的患者后被发现。目前，尚没有可用于预测开发中的候选药物是否会在人类中产生这些危及生命的病状(诸如SJS/TEN/HSS)的方法。

因为新药物开发可能平均耗费10亿元及10年时间，所以开发适用于在药物开发早期阶段预测候选药物的安全性概况的筛选方法将具有重大价值。

发明内容

本发明涉及自HLA库中鉴别出会与化合物结合的HLA复合物(若存在)的方法。此方法可依用于预测化合物是否将诱发不良药物反应，且若诱发不良药物反应，在哪一人类群体中诱发。

本发明方法包括至少4个步骤：(i)提供HLA库(例如I型或II型HLA库)，其包括位于支撑构件上的多个地址处的多种HLA复合物(例如可溶性HLA复合物)，各HLA复合物指定于一独特地址，(ii)使化合物与HLA复合物接触，(iii)判定该化合物是否会与库中的HLA复合物结合，且，若结合，(iv)则基于HLA复合物的地址鉴别与化合物结合的HLA复合物。本文所用的术语“独特地址是指支撑构件上一种且仅一种类型的HLA复合物所位于的点。

在一个实例中，HLA库为以微芯片为基础的库，其包括连接于支撑构件的多种HLA复合物。在此情形中，判定步骤可通过表面等离子共振(SPR)来执行。在另一实例中，HLA库为以细胞为基础的库，其包括各自表达特定HLA复合物的多个细胞株。各细胞株可通过表达HLA复合物的亲本细胞来制备，该亲本细胞优选地缺乏至少一种类型的HLA(例如I型HLA)。在此情形下，判定步骤可通过收集自各地址的HLA复合物，且通过质谱法判定HLA复合物是否与化合物结合来执行。或者，化合物可经同位素标记且通过检验各地址处的放射性来执行判定步骤。

以下说明书中阐述本发明一个或多个实施例的细节。本发明的其它特征或优点将自以下附图及实施方式、以及随附权利要求书中显而易知。

附图说明

图1为说明获得能够与HLA-B-β2微球蛋白复合物结合的肽的方法的流程图，其中该复合物是由稳定表达可溶性HLA-B分子的C1R细胞中产生。

图2为说明表面等离子共振检定的流程图。

图3为显示在37℃过夜下未脉冲自体性B-LCL细胞(敞开条)或以25μg/ml CBZ、OXC、GAB或媒剂对照脉冲的自体性B-LCL细胞(封闭框)的特异性溶解图表。分析三名患者的资料以获得平均值±SD。*：p<0.05(未脉冲B-LCL细胞相对于经脉冲B-LCL细胞)。**：p<0.001(药物处理组相对于媒剂处理组)。

图4显示在固定(封闭条)及未固定(敞开条)B-LCL存在下自体性T细胞增殖的图表。通过习知[3H]胸苷掺入检定测定T细胞增殖。*：p<0.05(药物处理组相对于媒剂处理组)。