[发明专利]在螯合剂存在下具有高稳定性的变体和包含变体的组合物

权利要求书

1.一种包含亲本α-淀粉酶的变体的组合物，其中使用根据SEQ ID NO:6的编号，所述变体在一个或多个选自195，193，197，198，200，203，206，210，212，213和243的位置包含取代，并进一步包含至少一种螯合剂，其中当在21℃和pH 8.0测量时所述螯合剂在低于10mM的浓度能够将游离钙离子的浓度从2.0mM减少至0.10mM。

2.前述任一项权利要求的组合物，其中当在21℃和pH 8.0在80mM氯化钾和49mM EPPS中测量时所述螯合剂在低于10mM的浓度能够将游离钙离子的浓度从2.0mM减少至0.10mM。

3.前述任一项权利要求的组合物，其中当在“材料和方法”中描述的测定法中测量时所述螯合剂在低于10mM的浓度能够将游离钙离子的浓度从2.0mM减少至0.10mM。

4.前述任一项权利要求的组合物，其中所述螯合剂能够在低于8mM，优选低于7mM，优选低于6mM，优选低于5mM，优选低于4mM的螯合剂浓度将游离钙离子的浓度从2.0mM减少至0.10mM。

5.包含亲本α-淀粉酶的变体的组合物，其中使用根据SEQ ID NO:6的编号，所述变体在一个或多个选自195，193，197，198，200，203，206，210，212，213和243的位置包含取代，并进一步包含至少一种螯合剂，其中当在21℃和pH 8测量时所述螯合剂能够在低于0.9倍能够将游离钙离子的浓度从2.0mM减少至0.10mM的柠檬酸盐浓度的螯合剂浓度将游离钙离子的浓度从2.0mM减少至0.10mM。

6.前述任一项权利要求的组合物，其中所述螯合剂能够在低于0.7倍，如低于0.5倍，如低于0.3倍能够将游离钙离子的浓度从2.0mM减少至0.10mM的柠檬酸盐浓度的螯合剂浓度将游离钙离子浓度从2.0mM减少至0.10mM。

7.前述任一项权利要求的组合物，其中所述变体在一个或多个对应于SEQ ID NO:6的成熟多肽的位置195，193，197，198，200，203，206，210，212，213或243的位置包含至少两个取代。

8.前述任一项权利要求的组合物，其中所述亲本α-淀粉酶序列通过至少一个下述取代修饰：位置193是[G，A,S,T或M]；位置195是[F,W，Y，L,I或V]；位置197是[F,W，Y，L,I或V]；位置198是[Q或N]；位置200是[F,W，Y，L,I或V]；位置203是[F,W，Y，L,I或V]；位置206是[F,W，Y，N,L,I,V， H,Q,D或E]；位置210是[F,W，Y，L,I或V]；位置212是[F,W，Y，L,I或V]；位置213是[G，A,S,T或M]或位置243是[F,W，Y，L,I或V]。

9.前述任一项权利要求的组合物，其中所述亲本α-淀粉酶序列通过至少一个下述取代修饰：位置193是T；位置195是F或Y；位置197是F或L；位置198是N；位置200是F；位置203是F；位置206是Y；位置210是Y；位置212是V，位置213是A或位置243是F。

10.前述任一项权利要求的组合物，其中使用SEQ ID NO:6用于编号，所述变体在181,182,183或184的氨基酸区中进一步包含至少一个、至少两个、或至少三个缺失。

11.前述任一项权利要求的组合物，其中所述变体在一个或多个对应于SEQ ID NO:6的成熟多肽的位置195，193，197，198，200，203，206，210，212，213或243的位置包含取代并在一个或多个对应于位置116，118，129，133，142，146，147，149，151，152，169，174，186，235，244，303，320，339，359，418，431，434，447或458的位置包含取代。

12.前述任一项权利要求的组合物，其中所述变体在螯合剂存在下在pH 8和31℃18小时之后具有至少60%剩余活性，其中所述螯合剂在21℃和pH 8.0在低于10mM的浓度能够将游离钙离子的浓度从2.0mM减少至0.10mM。