[发明专利]标记化探针-水溶性载体复合物

说明书

技术领域

本发明涉及在水溶性载体上结合两种以上的探针、进一步结合标记物而成的标记化探针-水溶性载体复合物的制作方法；利用该方法制作的标记化探针-水溶性载体复合物；及其使用方法。通过使用该标记化探针-水溶性载体复合物，能够高灵敏度地进行稳定的检测和测定。

背景技术

在使用跟被测物质特异性结合的探针与标记物的结合物、以被测物质与标记物藉由探针的结合量为指标来对被测物质进行检测和测定的方法中，其灵敏度通常由探针和标记物的分子数来决定。即，标记物相对于1分子探针所结合的分子数是有限的，该比例决定了灵敏度。

因此，通过对探针本身进行聚合化来制作聚合物，由此会增大分子量，通过增加与该聚合物结合的标记物的分子数来进行反应性得到提高的高灵敏度化(专利文献1)。但是，探针聚合化的调节并不容易，尚未达到实用化。

另外还提出了将酶标记物和探针单独地共价键合在聚赖氨酸、氨基葡聚糖等载体上所得到的分子量增大、标记物的结合数多的标记物探针复合物(专利文献2)。但是，利用该技术尽管可增加反应性，但空白值下的反应也会增加，尚未达到检测和测定时的高灵敏度化。

进一步提出了下述提案：使酶标记物结合在聚赖氨酸等载体上并藉由载体上的标记物从而结合有探针的标记物-探针复合物(专利文献3)；使探针结合在葡聚糖等载体上，藉由载体上的探针从而结合有标记物的水溶性载体-探针复合物(专利文献4)；使亲水性的中介物结合在载体上从而在中介物上结合有探针和检测标记的标记物的探针复合物(专利文献5)；在藉由酶标记物结合有2分子以上的载体的复合物上结合有探针的嵌段化标记物探针(专利文献6)。

但是，上述现有技术中还存在反应性增加的同时空白值下的反应也会增加这样的技术课题，在以信号/噪音比的形式来评价反应性的情况下，难以得到高灵敏度且稳定的复合物。并且，在复合物的形成中，若首先进行载体与探针或标记物的结合，则由于载体的多官能性而难以再现性良好地制作所期望的复合物。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平11-295313号公报

专利文献2：日本特开2000-88850号公报

专利文献3：日本特开2001-181299号公报

专利文献4：日本特开2003-194821号公报

专利文献5：国际公开2006/011543

专利文献6：国际公开2006/070732

发明内容

发明所要解决的课题

为了使用跟被测物质特异性结合的探针与标记物的结合物，以被测物质与标记物藉由探针的结合量为指标，高灵敏度地进行被测物质的检测和测定，在1分子探针与标记物的结合物中必须含有大量的标记物。因此，需要制作大分子的探针与标记物的结合物。

但是，在使用会形成大分子结合物的载体的情况下，尽管反应性增加，但空白值下的反应也增加，结果难以得到高灵敏度且稳定的复合物。另外，若作为形成复合物的最初阶段进行载体与探针或标记物的结合，则由于载体的多官能性而难以再现性良好地制作所期望的复合物。因此，期待稳定地制作可解决上述课题的结合物和稳定地制作该结合物的方法。

解决课题的手段

本发明人想到，在标记化探针-载体复合物的制作中，在探针与标记物的结合中利用亲和素类与生物素的特异性结合，并且发现，通过在与载体结合之前进行亲和素类与探针的结合，能够再现性良好地制作灵敏度极高且稳定的复合物。此外发现，在为了化学结合而进行探针的化学修饰时，向探针导入硫羟基不会对探针的结合能力带来影响；进而通过使用水溶性载体作为载体，构建出了在以高灵敏度稳定地检测和测定中有用的标记化探针-水溶性载体复合物。

即，本发明涉及包括以下工序的标记化探针-水溶性载体复合物的制作方法。

工序1.使具有硫羟基、可与被测物质结合的探针与具有马来酰亚胺基的亲和素类结合，制成探针结合体；

工序2.接下来，使具有硫羟基的所述探针结合体与具有马来酰亚胺基的高分子水溶性载体结合，制成探针结合体-水溶性载体复合物；和

工序3.进一步将所述探针结合体-水溶性载体复合物与生物素化标记物混合，使探针结合体-水溶性载体复合物的亲和素类与生物素化标记物的生物素结合。

本发明还涉及通过该工序制作的标记化探针-水溶性载体复合物。

本发明进一步涉及使用了通过上述工序制作的标记化探针-水溶性载体复合物的测定法、免疫测定法或高灵敏度测定法。