[发明专利]CD49F通过PI3K/AKT/GSK3途径促进成体干细胞的增殖、专能性和重编程

权利要求书

1.用于制备成体干细胞的方法，所述成体干细胞具有CD49f阳性特征并且与预培养的干细胞相比显示出改善的同质性，所述方法包括：

(a)第一步骤，在非附着培养条件下培养成体干细胞；和

(b)第二步骤，从通过球形生长形成球体的细胞群分离成体干细胞。

2.制备同质成体干细胞的方法，其包括：

(a)第一步骤，制备包含干细胞的细胞来源；和

(b)第二步骤，从所述细胞来源分离CD49f阳性成体干细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在进行所述第一步骤一周之后，成体干细胞球体的数目为每1×10⁴个细胞30-50个球体，并且球体的平均直径为100-150μm。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，与在附着培养条件下培养的成体干细胞相比，在所述第二步骤中分离的成体干细胞表现出类似的或增加的CD49f表达水平。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一步骤所用的成体干细胞是从细胞来源分离的具有CD49f阳性特征的成体干细胞。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一步骤和第二步骤重复两次或更多次，并且所述方法还包括在第二步骤之后和重复的第一步骤之前将所述形成球体的细胞群分成单个细胞的步骤。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述第一步骤中通过调节PI3K/AKT/GSK3β培养所述细胞，使得CD49F表达或超表达。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，在所述第一步骤中，添加GSK3β抑制剂而培养所述细胞。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述第一步骤中，在增加OCT4、SOX2、LIN28和NANOG中至少一种的表达的条件下培养所述细胞，以增加CD49f的表达水平。

10.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，与通过在附着培养条件下培养来源于相同的细胞来源的成体干细胞而获得的成体干细胞相比，从所述第二步骤中分离的成体干细胞具有更高的OCT4、SOX2或它们两者的表达潜能。

11.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在所述第二步骤中的所述分离使用识别CD49f的表面抗原的抗体。

12.通过权利要求1或2所述的方法获得的成体干细胞，其具有CD49f阳性特征。

13.如权利要求12所述的成体干细胞，其特征在于，与通过在附着培养条件下培养来源于相同的细胞来源的成体干细胞而获得的纺锤形成体干细胞相比，由选自OCT4、SOX2、c-myc、桩蛋白、ilk、pI3K和nanog中的一个或多个基因编码的蛋白质高表达。

14.如权利要求12所述的成体干细胞，其特征在于，与通过在附着培养条件下培养来源于相同的细胞来源的成体干细胞而获得的纺锤形成体干细胞相比，PI3K和GSK3β高度磷酸化。

15.细胞治疗剂，其包含通过权利要求1或2所述的方法制备的且具有CD49f阳性特征的成体干细胞，或从其分化的细胞，作为活性成分。

16.如权利要求15所述的细胞治疗剂，其特征在于，所述治疗剂具有治疗一种或多种选自以下疾病的能力：骨骼系统病症、组织重建、循环系统病症、神经系统病症和免疫病症。

17.从成体干细胞制备分化的细胞的方法，其包括分化同质成体干细胞的步骤，所述同质成体干细胞是通过权利要求1或2所述的方法制备的且具有CD49f阳性特征。

18.用于鉴定多能性是否在用于分析的靶细胞中被重编程或用于分析的靶细胞是否维持多能性的方法，其特征在于，所述方法包括测量用于分析的靶细胞中CD49f表达水平的步骤。

19.包含CD49f的标志物，其用于重编程为多能细胞。

20.改善干细胞专能性的方法，其通过维持CD49f的表达进行。

21.如权利要求20所述的方法，其特征在于CD49f改善CD49f-PI3K/AKT/GSK3β信号转导所介导的专能性。