[发明专利]用于确定心血管疾病的风险的手段和方法

说明书

本发明涉及医学，具体涉及内科医学和/或心脏病学。

心血管疾病技术上包括影响心血管系统的任何疾病。然而，其通常用于指与动脉粥样硬化相关的那些疾病。

在美国和大多数的欧洲国家中，心血管疾病是死亡和残疾的第一起因。检测到心脏问题的时候，潜在的起因(动脉粥样硬化)通常是相当晚期了，已经进展了数十年。因此，不断增强的重点在于通过改进风险因素诸如健康饮食、运动和避免吸烟来预防动脉粥样硬化。

冠心病(或冠状动脉疾病(CAD))是指冠状循环不能为心肌和周围组织提供充足的循环。CAD是复杂的疾病，其被认为是由很多遗传因素、环境因素及这些因素中的相互作用引起的。事实上，已经鉴定了CAD的很多风险因素，包括吸烟、高龄、男性性别、糖尿病、高收缩压、心绞痛的个人史、高脂肪饮食、传染原(infectious agent)、肥胖、增加的血浆总胆固醇和低密度脂蛋白(LDL)胆固醇、增加的血浆甘油三酯及降低的血浆高密度脂蛋白(HDL)胆固醇。然而，家族史是CAD最重要的独立风险因素之一，且孪生子研究还表明遗传因素有助于CAD的发展。CAD的高死亡率、迟发性及家族中的拟表型造成的复杂化也在这个重要疾病的遗传解剖中呈现出大的挑战。

CAD的主要起因由缓慢发展的动脉粥样硬化斑块的形成和急性血栓性闭塞事件组成，导致了缺血性的并发症。

由于CAD代表了人的发病率和死亡率的主要起因，存在对创新的诊断策略和治疗策略的需要。目前，很难准确地预测受试者在将来是否会发展成CAD。现在，这是通过风险计算器来完成的，其并非非常准确。而且，本领域已知的风险计算器不能预测受试者是否已经缓慢地发展成斑块形成，或是否处于急性闭塞性事件的风险中。一些临床测试可用来评估个体是否患有心血管疾病，比如冠状动脉或外周动脉的变窄。例如，心电图、压力测试(运动心电图)、超声心动图、验血(用于测试某些脂肪、胆固醇、糖和蛋白质的反常水平)被用于诊断的目的。然而，这些测试中没有一个能可靠地预测个体患心血管疾病诸如冠状或外周动脉疾病的风险。因此，存在对新的生物标志物(biomarker)的需要，所述生物标志物能够更可靠地预测心血管疾病的风险。

本发明的目的是提供用于给处于患心血管疾病的风险中的受试者的样品分型及用于鉴别和/或治疗患有心血管疾病或处于患心血管疾病的风险中的受试者的手段和方法。本发明的又一目的是提供用于鉴别在心血管疾病治疗中有用的药物及用于监测这样的治疗的方法。

本发明通过测量存在于所述患者的样品中的miRNA，提供用于给样品分型及鉴别和/或治疗患有心血管疾病或处于患心血管疾病的风险中的患者的手段和方法。本发明还提供用于鉴别新的心血管疾病治疗的手段和方法。

本发明首次显示出miRNA在血小板中的表达水平的改变与心血管疾病相关。很多人寻找心血管疾病的遗传生物标志物，但是从未有人用血小板来完成。例如，已经显示，循环的miRNA是对于AMI的诊断有用的生物标志物2-4。据报道，心肌损伤后，miR-1和miR-208两者在血浆中是升高的。然而，可能的是，这些miRNA是自受损的心肌细胞释放到血流中，例如因为在出院的AMI患者中，miR-1的水平恢复正常。与在心血管疾病的急性期中考察循环的miRNA的这些研究相反，本发明人是在心血管疾病的稳定期中考察存在于血小板中的miRNA，其中释放自例如受损的心肌细胞的miRNA不再起作用。而且，由本发明人所发现的miRNA在之前的研究中并未被发现，因为在本发明之前，寻找与心血管疾病相关的miRNA的其它人并未寻求miRNA在血小板纯化样品(例如，富含血小板的血浆)中的水平。相反是在急性心血管疾病过程中测定例如血浆样品中的miRNA水平。然而，在急性心血管疾病的过程中，几种miRNA在全血或血浆样品中是被上调和/或下调的(即，异常调节的)。这些异常调节的miRNA包括释放自受损的心脏细胞的miRNA，而且包括例如释放自对心脏损伤起作用的活化白细胞的miRNA。同时，通常伴随急性心血管疾病的缺血性损伤已经对血或血浆中的几种miRNA的表达水平产生影响。之前的任何研究没有鉴别在本发明中被鉴别为心血管疾病的预测性风险因素的miRNA，因为这些miRNA没有以允许通过由发明人所使用的筛选法(微阵列)来测定CAD患者和健康对照之间的1.5-2倍的差异的高水平存在于心血管疾病的急性期的全血中微阵列，这种筛选方法是测试大量的总miRNA所需要的。