[发明专利]血管生成的调节

说明书

技术领域

本发明提供了治疗可以通过提供血管生成改善的病理状态的方法。本发明总体上涉及通过给予表达和/或分泌一种或多种促血管生成因子的细胞来提供血管生成。本发明还涉及药物发现方法来筛选可调节所述细胞表达和/或分泌一种或多种促血管生成因子的能力的试剂。本发明还涉及可以用来提供给予受试者的细胞的细胞库，所述细胞库包括具有所需的一种或多种促血管生成因子的表达和/或分泌水平的细胞。本发明还涉及包括具有所需的一种或多种促血管生成因子特定表达和/或分泌水平的细胞的组合物，例如药物组合物。本发明还涉及在将所述细胞给予要治疗的受试者之前实施的诊断方法，包括用于评估待给予的细胞所需效能的测定。本发明进一步涉及治疗后诊断测定以评估所述细胞对被治疗的受试者的效果。所述细胞是非胚胎干细胞、非生殖细胞，具有以下一个或多个特征：在培养物中长期复制，明确的长期复制的标志物，例如端粒酶、多能性标志物，和广泛的分化潜能，无需转化（transformed）。

发明内容

本发明广义上涉及提供血管生成的方法。

本发明还涉及提供一种或多种促血管生成因子来提供血管生成的方法。

促血管生成因子包括但不限于FGF、VEGF、VEGFR、NRP-1、Ang1、Ang2、PDGF(BB-同源二聚体)、PDGFR、TGF-β、内皮糖蛋白、TGF-β受体、MCP-1、整联蛋白α_vβ₃、α_vβ₃、α₅β₁、VE-钙粘蛋白、CD31、肝配蛋白、纤溶酶原激活物、纤溶酶原激活物抑制因子-1、eNOS、COX-2、AC133、Id2/Id3、血管生成素、HGF、Vegf、Il-1α、Il-8、Il-6、Cxcl5、Fgfα、Fgfβ、Tgfα、Tgfβ、MMP(包括mmp9)、纤溶酶原激活物抑制因子-1、血小板反应素、血管生成素1、血管生成素2、双调蛋白、瘦蛋白、内皮素-1、AAMP、AGGF1、AMOT、ANGLPTL3、ANGPTL4、BTG1、IL-1β、NOS3、TNFSF12和VASH2。

根据本发明，提供血管生成可以通过给予天然（即非重组地）表达和/或分泌一种或多种促血管生成因子的细胞或所述细胞的条件培养基来实现。细胞包括但不限于非胚胎干细胞且非生殖细胞的细胞，其具有某些胚胎干细胞的特征，但来源于非胚胎组织，并表达和/或分泌一种或多种促血管生成因子。所述细胞可以天然表达/分泌一种或多种促血管生成因子（即未经遗传或药物修饰以激活表达和/或分泌）。但是，天然表达子可以经遗传或药物修饰以增强效能。

所述细胞可以表达多能性标志物，例如oct4。它们还可以表达与长期复制能力相关的标志物，例如端粒酶。其他的多能性特征可以包括分化为多于一种胚层，例如外胚层、内胚层和中胚层的两种或三种的胚胎胚层，的细胞类型的能力。在培养物中这种细胞可以是或可以不是永生化的或转化的。所述细胞可以高度扩增而不转化并维持正常的核型。例如，在一个实施方案中，所述非胚胎干细胞、非生殖细胞可以在培养物中经历至少10-40次细胞倍增，例如50次、60次或更多，其中所述细胞没有转化并具有正常核型。所述细胞可以分化为内胚层、外胚层和中胚层胚胎细胞谱系两种中每一种的至少一种细胞类型，并可以包括分化为所有的三种谱系。进一步地，所述细胞可以是不致瘤的，例如不会产生畸胎瘤。如果细胞是转化的或致瘤的，并且需要使用它们来侵入，通过阻止细胞增殖形成肿瘤的处理，这种细胞可以是缺陷的，它们不会在体内形成肿瘤。这种处理在本领域内是众所周知的。

细胞包括但不限于以下编号的实施方案：

1.分离的扩增的非胚胎干细胞、非生殖细胞，所述细胞已经在培养物中经历至少10-40次细胞倍增，其中所述细胞表达oct4，没有转化并具有正常的核型。

2.如以上1所述的非胚胎干细胞、非生殖细胞，其进一步表达端粒酶、rex-1、rox-1或sox-2中的一种或多种。

3.如以上1所述的非胚胎干细胞、非生殖细胞，其可以分化为内胚层、外胚层和中胚层胚胎细胞谱系的至少两个谱系中的至少一种细胞类型。

4.如以上3所述的非胚胎干细胞、非生殖细胞，其进一步表达端粒酶、rex-1、rox-1或sox-2中的一种或多种。

5.如以上3所述的非胚胎干细胞、非生殖细胞，其可以分化为内胚层、外胚层和中胚层胚胎细胞谱系的每个的至少一种细胞类型。