[发明专利]片状细胞培养物解离系统

说明书

技术领域

本发明涉及用于解离片状的细胞培养物的系统及方法、以及用于评价片状的细胞培养物的解离状态的系统及方法。

背景技术

虽然近年心脏病治疗在不断革新进步，但仍然没有建立起重症心力衰竭的治疗体系。作为心力衰竭的治疗法，进行的是利用β阻滞剂、ACE抑制剂的内科治疗，但对于这些治疗不很奏效的重症化的心力衰竭，则进行辅助人工心脏、心脏移植等置换型治疗，也即外科治疗。

这类成为外科治疗对象的重症心力衰竭包括多种起因，如进行性心脏瓣膜症、高度的心肌缺血所致、急性心肌梗塞和其合并症、急性心肌炎、缺血性心肌病（ICM）、扩张型心肌病（DCM）等所致的慢性心力衰竭及其急性加重等。

根据上述原因和重症度，而应用瓣膜成形术/置换术、冠状动脉架搭桥术、左心室成形术、机械辅助循环等。

其中，对于ICM、DCM所致的高度左心室功能低下导致的心力衰竭而言，仅仅心脏移植和利用了人工心脏的置换型治疗可以视为其的有效治疗方法。但是，这些重症心力衰竭患者的置换型治疗存在慢性的供体不足、需要持续进行免疫抑制、引发合并症等很多需要解决的问题，难以称为适用于所有重症心力衰竭的普适治疗法。

由于这样严峻的心脏移植现状，在一个时期内曾尝试进行巴提斯塔（Batista operation）术等其它外科治疗，虽然作为心脏移植的代替治疗而广受关注，但最近这些手术的限制也逐渐显现，需要在手术法的改良和适应性的确立方面继续努力。

由这样的现状出发，作为重症心力衰竭治疗的解决方案，正在不断推进新型再生医疗的开发。

在重症心肌梗塞等中，心肌细胞陷入功能衰竭，进而发生成纤维细胞的增殖、间质纤维化，而呈现心力衰竭。随着心力衰竭的加重，心肌细胞受损直至细胞死亡，由于心肌细胞几乎不发生细胞分裂，因此心肌细胞数减少，心脏功能下降进一步加剧。

对于这类重症心力衰竭患者的心脏功能恢复而言，细胞移植法被认为是有用的，并已经开始了自身骨骼肌成肌细胞的临床应用。

近年，针对这些问题，通过使用利用组织工程学的温度响应性培养皿，提供一种包括来自于成体心肌以外部分的细胞的、能够用于心脏的三维结构的片状细胞培养物和其制造方法（专利文献1）。

在临床应用这样的细胞培养物时，为了确保其有效性、安全性，需要通过实施品质试验来进行品质管理。并且，在进行片状的细胞培养物的品质试验时，还需要对构成细胞培养物的细胞的细胞数、存活性、纯度等进行确认，但为了进行这些评价，利用酶将细胞培养物消化等而解离成单个细胞也是必不可少的。现状是，细胞培养物的解离例如如下进行：将细胞培养物放入管中，加入胰蛋白酶等酶，在培养箱内通过酶反应进行细胞间结合的解离，在规定时间后由培养箱取出，搅拌管内，确认细胞培养物的解离状态，在未完全解离时，再次放入培养箱内，然后手动重复同样的操作直至细胞培养物完全解离。

为了适当进行解离细胞的评价，利用酶反应的细胞培养物的解离需要充分进行使得不残留细胞块等。另一方面，当酶反应时间过长时会损伤细胞，从而不适合进行细胞的评价。因此，用于细胞培养物的解离的酶反应需要设置为必要的最低限度，为了适当进行细胞培养物的解离，需要在酶反应中再三确认解离的状态。但是，截至目前尚不存在用机械收到评价细胞培养物的解离状态的手段，需要操作者以肉眼进行确认，难以使酶反应时间达到最佳且导致操作者劳动量的增大。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2007－528755号公报

发明内容

发明要解决的问题

本发明涉及的是，为了对用于人及动物的疾病、伤病的治疗的片状的细胞培养物进行品质管理，通过酶消化等将细胞培养物适当解离。为了适当进行解离细胞的特性确认，需要以不伤害细胞的必要的最低限度的解离操作来制备可靠地进行了解离的、不残留细胞块的细胞。

本发明的目的在于提供能够简便可靠地进行构成细胞培养物的细胞的解离操作的系统，以制备适合实施片状细胞培养物的品质管理的细胞。

用于解决问题的方案