[发明专利]具有改进灵敏度的均相化学发光测试方法无效

专利信息
申请号: 201180024015.6 申请日: 2011-05-13
公开(公告)号: CN102892896A 公开(公告)日: 2013-01-23
发明(设计)人: N·沙皮尔;M·萨尔瓦蒂;J·托特勒本;H·阿哈万-塔夫蒂;R·S·汉德利 申请(专利权)人: 贝克曼考尔特公司
主分类号: C12Q1/66 分类号: C12Q1/66
代理公司: 上海市华诚律师事务所 31210 代理人: 傅强国;贾师英
地址: 美国加利*** 国省代码: 美国;US
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摘要:
搜索关键词: 具有 改进 灵敏度 均相 化学 发光 测试 方法
【说明书】:

背景技术

特异性结合测试是用于检测物质存在和数量的试验方法,并且是基于特异性识别并与特异性结合伴侣结合在一起。免疫测试是指一种特异性结合测试的例子,其中抗体和特定蛋白或者化合物相结合。在这个例子中抗体是特异性结合配对成员中的成员。核酸结合测试是另一种类型,其中互补的核酸链是特异性配对。特异性结合测试建立了一个广泛和发展的技术空间,能够进行疾病状态、感染器官以及药物滥用的精确检测。在过去的几十年里,人们投入大量的工作来设计具有必需的灵敏度、动态范围、稳定性、广泛适用性和适用于自动化的测试和测试方法学。

发光化合物,比如荧光化合物和化学发光化合物,由于它们可以发光的能力从而被广泛地应用在测试领域。由于这个原因,已经在测试中诸如上述提到的核酸测试和免疫检测测试中利用发光体作为标记。例如,特异性结合配对成员与发光体共轭,并且可以采用不同的方案,人们可以将观察到的发光水平和样品中分析物的浓度或仅仅是分析物的存在相关联。

这些特异性结合测试方法可以被宽泛地分为两类。均相法利用分析物特异性结合反应来调节或者创建一个可检测信号,而无需分析物特异性的和分析物非特异性的反应物之间的分离步骤。非均相模式,依赖于与分析物结合的可检测地被标记的特异性结合伴侣与游离的(不与分析物结合的)可检测的标记的特异性结合伴侣的物理分离。分离通常需要将关键的反应物固定到某种类型的固体基质上,以便进行某种类型的物理过程,例如过滤、沉淀、结块或者磁性分离,并且通常也需要洗涤步骤来去除游离的可检测地被标记的特异性结合伴侣。

颗粒,如乳胶颗粒和脂质体,在测试中也会被用到。举例说明,在均相测试中酶可以被捕获在用抗体或抗原标记的脂质体的水相中。在样品和补体存在下,引起脂质体释放该酶。抗体或抗原标记的脂质体,在水相中具有被包裹的水溶性的荧光或非荧光染料,或者溶解在脂质囊泡的脂双层中的脂溶性染料,可以利用该脂质体用于分析物的测试,该分析物能够进入与表面结合的抗体或抗原之间的免疫化学反应中。洗涤剂被用于将染料从脂质体水相中释放出来。

并入本文以供参考的美国专利6,911,305公开了一种检测聚核苷酸分析物的方法,该聚核苷酸分析物与第一膜上的用敏化剂或者敏化剂标记的探针结合。该膜与带有固定的化学发光前体的第二膜接触。在夹心的膜中激发敏化剂,产生单线态氧,单线态氧与化学发光前体反应在第二膜上产生可触发的化学发光化合物。可触发的化学发光化合物和试剂反应,在第二膜上产生化学发光,用于检测分析物。这些方法并不依赖于使反应物相接触的特异性结合反应,而是将第二膜作为试剂输送装置。

并入本文以供参考的美国专利6,406,913公开了测试方法,该方法包括:在一定条件下处理疑似含有分析物的介质,以致于分析物能引起光敏剂和化学发光化合物接近。当用光源照射光敏剂时,光敏剂产生单线态氧,单线态氧通过溶液扩散至化学发光化合物,并且当单线态氧紧密接近化学发光化合物时可以活化化学发光化合物。活化的化学发光化合物随后产生光。产生光的量与介质中分析物的量相关。在一个实施方式中,至少一种光敏剂或化学发光化合物与悬浮颗粒结合,另一种特异性结合配对成员也与其结合。

这些均相测试模式利用单线态氧扩散用于选择与分析物的化学发光化合物的活化关系,与现有技术的测试技术相比,该均相测试模式在自动化上提供了操作的便利性和灵活性。尽管这些优势,在测试设计和性能上的其他改进仍然是测试研发人员的目标。特别是提高特异性信号的产生,降低背景(比如非特异性信号)是人们想要的。本发明公开的测试方法通过提供简单的方法来提供或增加灵敏度,解决了这些需求。

发明内容

本申请公开了用于测定疑似含有分析物的样品中的分析物的方法、试剂、试剂盒和体系,其中所有试剂都是溶解在水溶液中。一种测试方法包括在一定的条件下处理疑似含有分析物的样品,如果存在分析物,敏化剂被带入具有化学发光化合物的活性构造中以便活化该化学发光化合物。包括样品在内的反应混合物也用一种试剂处理,以便降低与分析物不相关的信号。最后,使该样品经受一定条件(或者能量、或者活性化合物)以便引起敏化剂产生单线态氧,用于与化学发光化合物反应从而由化学发光化合物产生光,以便发出样品中存在分析物的信号。

具体实施方式

I.定义

烷基——含有1-20个碳原子的支链、直链或环状烃基,可用一个或多个除氢之外的其他取代基取代。本文中使用的术语“低级烷基”,指的是最多含8个碳原子的烷基。

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