[发明专利]用于患有II型糖尿病患者的肾功能的生物标记

说明书

相关申请

本申请要求享有于2010年4月12日提交的第61/322,949号美国临时申请的优先权。上述申请的全部教导通过引用的方式并入本文。

背景技术

肾小球在白蛋白尿和肾功能的调节中起到关键作用。除了其在芬兰型(Finnish type)先天性肾病综合征中的作用之外，在糖尿病中也证实了跨膜蛋白去氧肾上腺素(nephrin)(NPHS1)在调节肾表型中的重要性。在实验性糖尿病的模型中，已经将去氧肾上腺素基因表达的失调与与白蛋白尿联系在一起。糖尿病肾病的自然病史的主流传统观点认为白蛋白尿早于肾功能下降，但是近来这一观点已经受到挑战(Retnakaran等2006)。形形色色的报道指出，即使在没有白蛋白尿的情况下，肾功能下降(表示为肾小球滤过率，GFR)也可以是明显的(MacIsaac等2004)。虽然并不清楚去氧肾上腺素是否参与控制肾功能，但是，该文献主要强调了该蛋白质在反映为白蛋白尿的肾脏参数的改变中的作用。

鉴于肾功能在维持内环境稳定中的重要性和与增加肾功能降低风险的疾病(如II型糖尿病)的盛行，迫切需要用于诊断、预测和治疗肾功能降低的方法以及用于进行所述方法的试剂盒。

发明内容

除了其他内容之外，本发明提供用于检测对象肾功能降低的诊断和预测方法，以及治疗患有肾功能降低的对象的方法和用于进行这些方法中的任一方法的试剂盒。本发明至少部分地基于下列重要发现：在患有II型糖尿病的患者的尿中可检测到去氧肾上腺素蛋白质片段与肾功能降低有关，以及一种或多种去氧肾上腺素蛋白质片段的存在表明肾功能降低。

因此，在一个方面中，本发明提供通过检测哺乳动物对象尿样中的一种或多种去氧肾上腺素降解产物来检测该对象的肾功能降低的方法，其中，在尿样中检测出一种或多种去氧肾上腺素降解产物表明该对象的肾功能降低。在特别的实施方式中，所述对象是人。在一些实施方式中，所述对象是正常白蛋白尿的。在特别的实施方式中，所述对象患有II型糖尿病或者发展为II型糖尿病(T2D)的风险增加。在更加特别的实施方式中，所述对象已经被诊断为T2D一年以下。在某些实施方式中，所述对象的eGFR下降了至少1.0ml/min/1.73m²。

在某些实施方式中，所述一种或多种去氧肾上腺素降解产物的表观分子量为约25kDa、50kDa、60kDa或75kDa，并且在更加特别的实施方式中，表观分子量为约25kDa。可以通过包括ELISA、蛋白质印迹法、HPLC、SPR、SAT、适体、肽测序或MS/MS的多种手段检测所述一种或多种去氧肾上腺素降解产物。在某些实施方式中，使用抗体检测去氧肾上腺素降解产物，并且在更加特别的实施方式中，所述抗体是单克隆抗体。在特别的实施方式中，在尿样的无细胞部分中检测所述去氧肾上腺素降解产物。

在另一个方面中，本发明提供治疗肾功能降低的方法。例如，本发明的治疗方法可以包括本发明提供的诊断方法中的任一方法的步骤以及向对象给药用于肾功能降低的适当预防药物的其他步骤。

在又一个方面中，本发明提供用于检测哺乳动物的肾功能降低的试剂盒。所述试剂盒可以包括用于进行本发明提供方法中的任一方法的任一或所有组分。在一些实施方式中，所述试剂盒包括结合一种或多种去氧肾上腺素降解产物的抗体。在更加特别的实施方式中，所述试剂盒还包括使用说明书。在一些实施方式中，所述试剂盒包括适合用作阳性对照的一种或多种去氧肾上腺素降解产物。在某些实施方式中，在所述试剂盒中的抗体与免疫色谱器件相结合，如浸渍试验(dip test)。

本发明有利地使技术人员能够快速容易地鉴别患有肾功能降低的对象，包括按照现有测定法(如尿中的白蛋白水平)该对象表现为肾功能正常的情形。

具体实施方式

本发明提供用于诊断、预测和治疗患者(如糖尿病患者)的肾功能降低的试剂盒和方法。所述方法包括检测对象样本(如尿样)中的一种或多种去氧肾上腺素降解产物的步骤。本发明的示例实施方式的说明如下。

去氧肾上腺素降解产物

去氧肾上腺素（NPHS1的蛋白质产物）是在肾脏中行使肾小球滤过屏障功能的细胞粘附分子的免疫球蛋白家族成员。该基因主要在肾脏组织中表达，并且所述蛋白质是在肾小球足细胞的裂孔隔膜发现的I型跨膜蛋白。去氧肾上腺素基因已在多种生物中被识别，一些去氧肾上腺素基因总结于下表A中。

表A：去氧肾上腺素基因