[发明专利]利用免疫色谱法的测定法、免疫色谱测试条和用于免疫色谱法的测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及通过免疫色谱法测量样品中分析物的测量方法，用于通过免疫色谱法测量样品中分析物的免疫色谱测试条，和用于免疫色谱法的测量试剂盒，其包括免疫色谱测试条和稀释溶液。本发明特别涉及通过使用免疫色谱法测量血红蛋白浓度和源自血液的同一样品中的第二分析物的浓度并使用获自血红蛋白测量值的血细胞比容校正所述第二分析物的测量值的技术。

背景技术

在医学领域、医学研究领域等中，必须测量血液中的某些成分(诸如血清清蛋白、免疫球蛋白、肝炎病毒、类风湿因子和C反应蛋白)，且为了该目的已经开发和实施了多种测量方法。在这些方法中的常用方法中，免疫学测定成为主流且，在免疫学测定中，对由患者或受试者收集和获得的血液(下文中称为全血)进行离心，以获得上清(血清或血浆)，所述上清使用合适的缓冲溶液稀释，并且使用与分析物特异性反应的抗体来检测血清或血浆中的分析物。这样的测定包括作为定性测试的，使用多克隆抗体的，基于单一射线的免疫扩散方法。胶乳凝集免疫测定和免疫浊度法作为代表性的定量测试包括在其中。

“在检查患者的过程中希望进行多种测试”的需要近期甚至在门诊部和小医院中越来越多，且测试日益作为即时检验(POCT)，而非常规转包(subcontract)检验来进行。这样的POCT试剂的代表性实例包括免疫色谱法的侧向流动测试条。由于由血液中分离血浆和血清的操作很麻烦且需要POCT领域的技巧，使用全血的检验是理想的。通过使用免疫色谱法测量全血液样品中分析物的测定公开为，例如，使用装配有血细胞分离膜的测试条的方法以及试剂和试剂盒(专利文献1)。然而，当通过该程序分离的血浆直接用于通过基于夹心式免疫反应原则的免疫色谱法的测量时，如果分析物过量存在，则有问题，即“钩状现象”(也称为“前带现象”)发生并导致数值的明显减小，尽管样品中存在高度浓缩的分析物。因此，全血通常是溶解的和稀释的，以用于测量，由此保持在预定的测量范围内。然而，在这种情况下，分析物的浓度通过血细胞体积稀释并且测量值与血清或血浆样品相比降低，因此，测量值必须通过使用血细胞比容值(红细胞的体积百分比)来校正。利用血细胞比容值(红细胞的体积百分比)校正测量值在下文中也将简称为血细胞比容校正。

数值明显减小的问题通常通过统一乘以获自健康个体的平均血细胞比容值的校正系数来进行校正。然而，血细胞比容值在个体之间变化并且其参考值范围在男性中为39-52％，在女性中为35-48％。因此，精确的分析物浓度不能通过利用乘以统一的系数的校正来获得。因此，为了进行精确血细胞比容校正，必须使用通过利用用于测量分析物浓度的同一样品分别测量的血细胞比容值进行校正。

血细胞比容值常规通过基于离心法的微量血细胞比容法或通过利用自动化血细胞计数器通过由红细胞数量和平均红细胞体积进行计算来获得。另一方面，报告了另一种利用由全血测量结果转化为在测量血清或血浆情况下的测量值的方法作为转化血液测量结果的方法，在该方法中，测量全血的血红蛋白浓度(g/L)；采用通过使获得的血红蛋白浓度乘以约3/10获得的数值作为血细胞比容值(％)；并使用血细胞比容值将来自全血的测量结果转化为测量血清或血浆情况下的测量值(专利文献2)。然而，由于血红蛋白浓度和血细胞比容值必须通过与免疫色谱法测定不同的方法来获得，所以该方法很麻烦，需要时间和成本，并因此不能满足POCT领域中测试的需求。

因此，需要基于免疫色谱法的同时测量分析物和血红蛋白的方法；然而，由于全血中的血红蛋白浓度正常为数十g/L至200g/L，这是非常高的浓度，需要进行10,000-至100,000-倍稀释，以用于基于正常夹心式免疫测定原理的测定。在该方法中，需要大量稀释溶液来进行一步式稀释，这导致测量精确性的破坏。利用多步式稀释的方法存在缺乏用于POCT领域中测试方法的实用性的问题。为了解决这些问题，需要能够测量的免疫色谱法测定，其中具有至多50-400倍的全血的溶血稀释操作。

引用列表

专利文献

专利文献1：公开的PCT申请WO 2010/001598

专利文献2：日本特开专利公开号2001-272403

发明概述

技术问题