[发明专利]具有因子VII活性的融合蛋白质

说明书

技术领域

本发明涉及具有因子VII(FVII)活性的融合蛋白质；以及，更特别地，涉及包含FVII和转铁蛋白并且与未融合天然型FVII相比具有0.7或更高的FVII比活性(specific activity)的融合蛋白质、为其编码的DNA、包含所述DNA的重组载体、以及包含所述重组载体的宿主细胞。

背景技术

多种出血性疾病由缺乏凝血因子引发。最常见的疾病是分别由凝血因子VIII和IX缺乏或异常引发的血友病A和B。

血友病A是由有缺陷的因子VIII基因的X连锁隐性特征(X-linkedrecessive trait)所引起的遗传性出血性疾病。血浆源性或重组的因子VIII的浓缩物已被用于治疗血友病A。血友病B是由因子IX缺乏或功能不良而引起的，通过使用血浆源性或重组的因子IX的浓缩物对其进行治疗。但是，出现针对替代因子(replacement factor)的同种抗体仍是血友病A和B的治疗中严重的医学问题。在高至30％的血友病A患者中产生针对因子VIII的抗体。尽管针对因子IX的抗体产生的较少，但它们对免疫耐受诱导治疗较不敏感，导致更严重的结果。

凝血由血管壁损伤之后暴露于循环血液的组织因子与激活形式的因子VII(FVIIa)之间形成复合物而引发。这样的复合物激活因子IX和因子X，并且所产生的因子Xa产生有限量的凝血酶。在正反馈环中，凝血酶激活凝血级联的多种因子(例如，因子VIII、因子V、因子XI等)，并且所激活的因子构成因子X酶复合物(factor Xase complex)或前凝血素酶复合物。这些复合物还扩增其自身的生成并且产生凝血酶。这种被称为“凝血酶爆发(thrombin burst)”的足够量的凝血酶将出血部位的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，从而实现完全止血。但是，在具有针对因子VIII或因子IX的高浓度中和抗体的血友病患者的情况中，因为不能产生上述因子X酶复合物，所以达不到足够的止血。FVIIa已用作主要的治疗剂，用于具有针对因子VIII或因子IX的中和抗体的患者，因为FVIIa可激活因子X(甚至在不存在因子VIII和因子IX时)，从而最终产生足够量的凝血酶以实现期望的治疗效果。

FVII是由406个氨基酸组成的单链糖蛋白，分子量为50kDa，并且作为酶原而被分泌到血流中。FVII由四个不同的结构域组成，即，氨基末端-羧基谷氨酸(Gla)结构域、两个表皮生长因子(EGF)样结构域、以及丝氨酸蛋白酶结构域(Hagen FS等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，83(8)：2412-2416，1986)。经过蛋白水解位于Arg152-Ile153的单个肽键，通过形成由二硫键连接的两个多肽链(即，N末端轻链(24kDa)和C末端重链(28kDa))，FVII被转化为其激活形式FVIIa。FVII以500ng/mL的浓度存在于血浆中，并且1％(即，5ng/mL)的FVII作为FVIIa而存在。

同时，已报道血浆中FVII的半衰期为约4小时(3～6小时)，而FVIIa的半衰期为约2.5小时。由于半衰期短，需要通过多次静脉内注射或连续注射来施用FVIIa。然而，就高治疗费用和使患者不适而言，这会限制FVIIa的治疗应用。

为了克服这些问题，已提供方法用于制备包含FVII以及与其相连的融合伴侣的融合蛋白质，但是所产生的蛋白质具有丧失其生物活性的问题，尽管与非融合蛋白质相比，较短的体内半衰期有所提高。

因此，有需要提供和获得具有提高的体内半衰期同时保持天然型FVII的生物活性的FVII融合蛋白质。

发明内容

技术问题

本发明的一个目的是提供具有天然型FVII的生物活性的融合蛋白质。

本发明的另一个目的是提供编码所述融合蛋白质的基因。

本发明的另一个目的是提供包含所述基因的重组载体。

本发明的另一个目的是提供包含所述重组载体的宿主细胞。

问题的解决方案

根据本发明的一个方面，提供了包含因子VII(FVII)和转铁蛋白的融合蛋白质，其中所述转铁蛋白与所述FVII的C末端相连接。

根据本发明的另一个方面，提供了编码所述融合蛋白质的DNA。

根据本发明的另一个方面，提供了包含所述DNA的重组载体。