[发明专利]大肠肿瘤的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及使用标记基因进行的大肠肿瘤、特别是进行性腺瘤、早期癌的检测方法。更具体地涉及，以粪便中所含的标记基因来源RNA的量作为指标，检测被采集了该粪便的受验者是否患大肠肿瘤的方法。

本申请要求2010年6月16日在日本国提出的特愿2010-137460号的优先权，在此援引其内容。

背景技术

大肠癌引起的死亡者在增加。大肠癌引起的死亡者在所有癌引起的死亡者中，男性方面排在第4位，女性方面排在第1位，是一种死亡者多的癌(2005年度癌症死亡统计)。此外，在2020年的癌患者估计中，推测在男性中排第二位，在女性中排第一位。因此，强烈需要包含二次预防在内的综合性大肠癌对策。与其他癌相比，大肠癌在早期发现、并进行合适治疗的情况下的5年生存率非常高，因而大肠癌的群体筛查(mass screening)是最有效果的方法之一。

为了大肠癌的确诊，一般进行能够直接视觉确认大肠内的内视镜检查，再视需要进行患处的活体检查。然而，这些方法是侵袭性的，且需要高度的专业技术，因此不适合群体筛查这样的初筛。

为了群体筛查，简便且非侵袭性的检测方法是重要的。现在能够利用的唯一的非侵袭性方法是考察有无潜血的粪便检查、即便潜血检查，其作为大肠癌的群体筛查的标准方法被广泛采用。然而，就便潜血检查而言，粪便中出现血红蛋白并不是肿瘤特异性的，因此，缺点是灵敏度以及特异性低(灵敏度30~90%、特异性70~98%)，假阴性、假阳性相当多地存在。

非侵袭性检测大肠癌的方法，有以粪便中所含的成分作为指标的方法。粪便中包含从癌组织剥离的细胞，因而，可以认为粪便的组成能够反映消化道病变。因此，以正常组织中几乎不表达、但癌组织中高表达的基因作为生物标记，以粪便中该基因的mRNA量作为指标，将癌患者与健康正常人相区别。这样，通过用粪便作为分析物，不存在侵袭性，可以飞跃式地改善受验者的检查负担。

例如已经报告了检测粪便中的K-ras、p-53、APC基因突变、微卫星不稳定性等的利用DNA的方法(例如，参照非专利文献1~4)。此外，还开发出了检测粪便中的蛋白激酶C(PKC)等mRNA的方法(例如，参照非专利文献5~7)、考察粪便的细胞级分的CD44变体的表达的方法(例如，参照非专利文献8)、检测粪便中所含的基因组DNA的甲基化的有无的方法(例如，参照非专利文献9)等。

这样，报告了许多可作为生物标记利用的基因，可以以它们在粪便中的含量作为指标，来检测大肠癌。然而，存在的问题是：使用这些生物标记时的灵敏度基本上与便潜血法程度等同或者较之更低。特别是，在群体筛查中，早期癌、癌化可能性高的进行性腺瘤这样的可通过内视镜或手术切除治愈的肿瘤的检测是重要的，但上述任何生物标记对早期癌、进行性腺瘤的检测灵敏度均比便潜血法还要差。因此，强烈希望开发以粪便作为分析物高灵敏度地检测早期癌等的方法。

作为灵敏度高于便潜血法的大肠癌的检测方法，本发明人公开了以粪便中的COX-2(环加氯酶-2，Cyclooxygenase-2)基因的表达量作为指标的方法(例如，参照专利文献1~4。)。COX-2基因作为大肠癌的基因标记是非常优秀的，但还存在COX-2基因的表达量不增大的大肠癌(COX-2阴性大肠癌)，无法检测这样的案例。专利文献3也公开了MMP-7(基质金属蛋白酶-7)基因、Snail基因等可与COX-2基因组合使用的基因标记，但这些基因的表达量许多情况下显示与COX-2基因的表达量基本相同的行为，因此，即使在将这些基因标记组合使用的情况下，提高COX-2阴性大肠癌的检测灵敏度也是困难的。此外，COX-2基因、MMP-7基因、以及Snail基因存在依赖癌的进行性而粪便中的表达量增大的倾向，因而也存在与进行性癌相比，早期癌的检测灵敏度低的问题。

另一方面，有报告称，在大肠癌中，CKB(肌酸激酶B，Creatine kinase B)以及hnRNP F(异源核核糖核酸F，heterogeneous nuclear ribonucleoprotein F)的表达量及细胞内定位发生变化(例如，参照非专利文献10)。还有报告称，对于CKB，除此之外，子宫癌中的表达量也增大，血清中的CKB含量还可以用作子宫癌标记(例如，参照非专利文献11)。然而，关于粪便中的CKB含量作为大肠癌标记的利用可能性，目前完全没有报导。本领域技术人员应当理解的是，编码表达量的增减依赖于癌化的蛋白质的基因未必一定能够作为临床上有用的生物标记加以利用。

现有技术文献

专利文献

专利文献1专利第4134047号公报