[发明专利]分离Tr1细胞的新方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于鉴别和/或分离Tr1细胞、休眠Tr1细胞和/或活化Tr1细胞的方法，经过富集的Tr1细胞、休眠Tr1细胞和/或活化Tr1细胞的群体，去除Tr1细胞、休眠Tr1细胞和/或活化Tr1细胞的群体，以及用于诊断或治疗慢性炎症性疾病、自身免疫疾病、过敏性疾病、癌症和器官移植病症的方法和试剂盒。

背景技术

免疫系统的体内平衡依赖于针对入侵病原体的免疫应答与针对自身抗原的免疫耐受之间的平衡。中枢和外周耐受都是用于诱导和维持T细胞耐受的重要机制。在过去的十年里，已经对在维持外周免疫耐受方面扮演重要角色的调节性T细胞(Treg)给予了众多关注。现在已经公认Treg可以分成两种不同的亚型：天然Treg(nTreg)和诱导型Treg群体，例如TGF-β诱导的Treg细胞、Tr1细胞或Th3细胞。因为这些Treg群体在外周免疫耐受中扮演重要角色，所以能够鉴别、分离或富集这些不同的Treg亚组以便促进对于免疫病症(例如慢性炎症性疾病、自身免疫疾病或过敏性疾病)的诊断、评估或治疗已经变成一个关键议题。

举例来说，自nTreg被鉴别以来，其一直是通过CD25的表达来进行鉴别。然而，CD25也是常规T细胞(convT)的一种活化标志物，因此不是Treg细胞所专有的。通过鉴别例如Foxp3、CD127(WO2007140472)、CD45RA(WO2007/117602)、CD 134(WO2009/036521)和CD49d(WO2009/047003)等细胞表面或细胞内标志物已经在人类nTreg的辨别方面取得了最新进展。关于Tr1细胞，其特异性鉴别仍然存在困难且主要基于IL-10分泌辨别。因此需要提供用于更好地且更精确地辨别Tr1细胞的方式。

此外，Tr1细胞已被证实可用于细胞疗法中，Tr1细胞注射入患有克罗恩病(Crohn’s disease)的患者体内以改善其状况。鉴于Tr1细胞在细胞疗法中的用途，因此需要更精确地鉴别和分离Tr1细胞。

发明人已经发现可使用CD127和CD62L细胞表面标志物特异性地鉴别Tr1细胞。实际上，除CD4标志物和任选的CD25标志物以外，另外使用CD127和CD62L这两种标志物允许在常规的休眠和活化T细胞以及休眠和活化nTreg中辨别Tr1细胞。

发明内容

本发明的一个目的是一种鉴别Tr1细胞群体的方法，其包含检测细胞群体上的CD4、CD127和CD62L标志物的细胞表面表达，其中表达：

-CD4和

-低水平的CD127，和

-低水平的CD62L，

的细胞是Tr1细胞。

本发明的另一个目的是一种鉴别休眠Tr1细胞群体的方法，其包含检测细胞群体上的CD4、CD25、以及CD127和CD62L标志物中至少一种的细胞表面表达，其中表达：

-CD4和

-低水平的CD127和CD62L中的至少一种，

且不表达：

-CD25，

的细胞是休眠Tr1细胞。

本发明的另一个目的是一种鉴别休眠Tr1细胞群体的方法，其包含检测细胞群体上的CD4、CD25、CD127和CD62L标志物的细胞表面表达，其中表达：

-CD4和

-低水平的CD127，

-低水平的CD62L，

且不表达：

-CD25，

的细胞是休眠Tr1细胞。

本发明的另一个目的是一种鉴别活化Tr1细胞群体的方法，其包含检测细胞群体上的CD4、CD25、CD127和CD62L标志物的细胞表面表达，其中表达：

-CD4，

-CD25，

-低水平的CD127，和

-低水平的CD62L，

的细胞是活化Tr1细胞。

本发明的另一个目的是一种用于分离休眠或活化Tr1细胞群体的方法，其包含如上所述鉴别休眠Tr1细胞群体或活化Tr1细胞群体，和分离所述群体。

本发明的另一个目的是一种分离的休眠Tr1细胞或活化Tr1细胞群体，其是通过如上所述的方法获得。

本发明的另一个目的是一种经过分离的Tr1细胞群体，其是通过如上所述的方法获得。

本发明的另一个目的是一种经过分离的休眠Tr1细胞群体，其是通过如上所述的方法获得。

本发明的另一个目的是一种经过分离的活化Tr1细胞群体，其是通过如上所述的方法获得。