[发明专利]二价阳离子结合蛋白在阴离子交换树脂上的纯化方法

权利要求书

1.用于纯化二价阳离子结合蛋白的方法，其包括以下步骤：

    (a) 将不存在二价阳离子的加样缓冲液中的二价阳离子结合蛋白加样到阴离子交换树脂材料，并任选用不存在二价阳离子的洗涤缓冲液洗涤已加样的阴离子交换树脂材料；和

(b) 用包含至少一种二价阳离子的洗脱液洗脱二价阳离子结合蛋白，以形成包含二价阳离子结合蛋白的洗出液；

其中步骤(b)中洗脱液的pH比步骤(a)中洗涤缓冲液的pH高，或在不实施洗涤步骤的情况下，步骤(b)中洗脱液的pH比步骤(a)中加样缓冲液的pH高。

2.权利要求1的方法，其中步骤(b)中洗脱液的pH比步骤(a)中洗涤缓冲液的pH高至少0.5个pH单位，或在不实施洗涤步骤的情况下，步骤(b)中洗脱液的pH比步骤(a)中加样缓冲液的pH高至少0.5个pH单位。

3.权利要求1或2的方法，其中步骤(a)中洗涤缓冲液的电导率等于或小于步骤(b)中洗脱液的电导率，或在不实施洗涤步骤的情况下，步骤(a)中加样缓冲液的电导率等于或小于步骤(b)中洗脱液的电导率。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中步骤(b)中至少一种二价阳离子选自：Ca²⁺、Be²⁺、Ba²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Sr²⁺、Zn²⁺、Co²⁺、Ni²⁺和Cu²⁺或其组合。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述阴离子交换树脂材料具有带正电的基团，其选自二乙基氨基乙烷(DEAE)、二甲基氨基乙烷(DMAE)、三甲基氨基乙基(TMAE)、聚乙烯亚胺(PEI)、季氨基烷基、季氨基乙烷(QAE)和季铵(Q)。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述阴离子交换树脂材料携带伯胺作为配体，其选自氨基己基、苄脒、赖氨酸和精氨酸。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述二价阳离子结合蛋白为钙结合蛋白。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述二价阳离子结合蛋白为维生素K依赖性蛋白。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述二价阳离子结合蛋白选自因子IX、因子VII和膜联蛋白V。

10.可通过权利要求1-9中任一项的方法得到的纯化的二价阳离子结合蛋白。

11.包含实施权利要求1-9中任一项的方法所用工具的试剂盒。

12.权利要求11的试剂盒，其包含洗脱液，所述洗脱液包含至少一种二价阳离子，适合从缓冲液中的阴离子交换树脂材料洗脱二价阳离子结合蛋白，其中洗脱液的pH比所述缓冲液的pH高。