[发明专利]使用分析物和过程控制信号的单次读取确定而鉴定含分析物的样品的方法和设备

说明书

相关申请案

本申请要求于2010年6月30日提交的美国临时申请No.61/360,296的权益。此在先申请的全部公开内容据此以引用方式并入。

发明领域

本发明涉及关于诊断测定法的生物技术子领域。更具体地讲，本发明涉及在包括内控的测定法中进行分析物检测，其中使用不同的探针检测分析物和内控。在一个高度优选的实施方案中，使用具有相同可检测标记物的不同杂交探针检测单一混合物中的核酸分析物。

发明背景

检测分析物（如核酸、蛋白质、脂质、碳水化合物等）的存在的现代测定法依赖于使用阳性对照来确认过程可靠性。例如，测定法可能力图使用核酸扩增和随后通过探针杂交和检测来测定靶核酸。经过扩增的样品可包含与分析物核酸共扩增的内控（下文称为“IC”）核酸。扩增产物可有利地具有可使用不同的杂交探针检测的非相同序列。检测IC扩增产物将确认测定程序的扩增和检测组成部分的完整性。该信息在未能检出分析物扩增产物时很有用。在这种情况下检出IC信号可验证分析物阴性结果。分析物扩增子及IC扩增子的特异性杂交探针通常通过它们所具有的标记物或通过空间分离而区分。

包括内部过程控制的基于探针的测定法（包括蛋白和核酸测定法）对于IC和分析物的检测通常有以下区别之一：(1)独立于分析物来检测IC；以及(2)独立于分析物加IC的组合来检测分析物。美国专利No.6,586,234使用检测IC和分析物核酸的两次读取系统阐述了这两种可能性。当独立于IC加分析物的组合来检测分析物核酸时，可针对所产生的分析物杂交信号落在阳性评分所需的阈值截止值之下的样品而评估后者的杂交信号。例如，低于分析物检测的阈值截止值的信号作为另外一种选择可表明不存在分析物或测定法失效。如果在代表IC加分析物的组合的第二次读取中检出信号，则将该结果解释为验证分析物阴性结果。换句话讲，检出IC加分析物的足够信号表明必须已经检出IC，并因此可验证分析物阴性结果。应当显而易见的是，这样的系统要获得成功取决于从代表IC和分析物的杂交信号的组合中分离分析物杂交信号的能力。

在分析物检测领域中遇到的一个难题涉及：当不同探针（例如，流体连通且在溶液中游离而非固定的不同探针）之间无空间分离而进行检测时，分析多重反应所需的不同标记物的数量。这可以在共扩增IC核酸和两种不同的靶核酸的测定法的背景下加以理解。通过具有一个标记物的IC探针，用于检测其余两个靶标的一套探针可用第二标记物进行标记。第二标记物的阳性检测信号表明存在两种分析物之一，但不能将一者与另一者进行区分。随着分析物数量的增加，解析反应性物质所需的再次测试的次数也相似地增加。换句话说，在阳性评分多重测定法中用于鉴定反应性物质的再次测试负担是不利的，尤其是当阳性样品所占的分数变得很大时。

本发明解决了对简化的分析物鉴定系统的需求。

发明概述