[发明专利]集成样品制备系统和稳定的酶混合物

权利要求书

1. 一种包含以下的微流体卡：

    a)配置用于引入生物学样品的装载端口；

    b)一个或多个以下组件：

       i)废物室；

       ii)与所述装载端口可操作地连接的裂解支路，其中所述细胞裂解支路包含：i)混合室和ii)含有裂解缓冲液的第一密封包装；其中配置所述裂解支路以在所述混合室中用所述裂解缓冲液裂解所述生物学样品，以产生裂解的样品；

       iii)与所述裂解支路和所述废物室二者均可操作地连接的核酸提取支路，其中所述核酸提取支路包含：1)配置以结合在所述裂解的样品中存在的核酸的核酸提取组分；2)含有洗涤缓冲液的第二密封包装；3)含有洗脱缓冲液的第三密封包装；和4)配置用于将所述洗脱缓冲液泵送到所述核酸提取组分以产生提取的核酸混合物的泵组件；

       iv)与所述核酸提取支路可操作地连接的扩增支路，其中所述扩增支路包含稳定的酶混合物，其中所述稳定的酶混合物包含可用于对所述提取的核酸进行扩增以产生扩增的核酸的至少一种扩增相关的酶；

    c)与所述扩增支路可操作地连接的片段化支路，其中所述片段化支路包含：i)配置用于消化所述扩增的核酸以产生片段化核酸的试剂混合物；和/或ii)配置用于使所述扩增的核酸机械上片段化以产生片段化核酸的片段化组分；和

    d)与所述片段化支路可操作地连接的接头连接支路，其中所述接头连接支路包含：i)配置用于测序方法的核酸接头；和ii)配置用于让所述核酸接头与所述片段化核酸连接以产生核酸测序文库的连接酶混合物。

2. 权利要求1的微流体卡，其中所述至少一种扩增相关的酶包含可用于实施全基因组扩增(WGA)、PCR或TMA的酶。

3. 权利要求1的微流体卡，其中所述至少一种扩增相关的酶选自：Phi-29聚合酶、大肠杆菌DNA聚合酶I、无机焦磷酸酶或其任意组合。

4. 权利要求1的微流体卡，其中所述稳定的酶混合物进一步包含：i) BSA；ii)糖；和iii)至少一种选自以下的另外组分：无机盐、二价金属阳离子、缓冲剂、乳化剂和还原剂。

5. 权利要求1的微流体卡，其中所述稳定的酶混合物进一步包含：i) BSA；ii)糖；iii)无机盐；iv)二价金属阳离子；v)缓冲剂；vi)乳化剂；vii)和还原剂。

6. 权利要求1的微流体卡，其进一步包含：e)与所述接头连接组分可操作地连接的纯化支路，其中所述纯化支路包含核酸纯化组分，其中所述核酸纯化组分包含经配置以与所述核酸测序文库上的所述接头杂交的锚定核酸序列。

7. 权利要求1的微流体卡，其进一步包含经配置以允许用户取出至少部分所述核酸测序文库的出口。

8. 权利要求1的微流体卡，其中所述片段化支路进一步包含：配置用于补齐所述片段化核酸末端的至少一类酶。

9. 权利要求1的微流体卡，其中所述接头连接支路进一步包含：配置用于补齐所述核酸测序文库末端的至少一类酶。

10. 一种包含以下的稳定的酶混合物：

    a)至少一类酶；

    b)牛血清白蛋白(BSA)；

    c)糖；     

    d)无机盐；

    e)二价金属阳离子；

    f)缓冲剂；

    g)乳化剂；和

    h)还原剂。

11. 权利要求10的稳定的酶混合物，其进一步包含聚乙二醇(PEG)。

12. 权利要求10的稳定的酶混合物，其中所述稳定的酶混合物呈冻干形式。

13. 权利要求10的稳定的酶混合物，其中所述BSA在所述稳定的酶混合物中以0.05% - 3.0%的浓度存在。

14. 权利要求10的稳定的酶混合物，其中所述糖以所述稳定的酶混合物的5-35%的浓度存在。

15. 权利要求10的稳定的酶混合物，其中所述糖为非还原性糖。

16. 权利要求10的稳定的酶混合物，其中所述至少一类酶包含聚合酶。