[发明专利]人造多纤维素酶体及其用于酶分解弹性底物的用途有效
申请号: | 201180035095.5 | 申请日: | 2011-07-19 |
公开(公告)号: | CN103025879A | 公开(公告)日: | 2013-04-03 |
发明(设计)人: | 沃尔夫冈·H·施瓦茨;扬·克劳斯;弗拉迪米尔·V·茲维勒夫;丹尼尔·霍恩布尔格;达尼埃拉·柯克;路易斯-菲利普·许尔德 | 申请(专利权)人: | 沃尔夫冈·H·施瓦茨 |
主分类号: | C12P7/10 | 分类号: | C12P7/10;C12N9/42 |
代理公司: | 北京金信立方知识产权代理有限公司 11225 | 代理人: | 朱梅;徐琳 |
地址: | 德国*** | 国省代码: | 德国;DE |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 人造 纤维素酶 及其 用于 分解 弹性 用途 | ||
1.一种无颗粒的或颗粒结合的复合物,其包含:
a)主链支架,所述主链支架包含至少四个结合位点,其中,所述结合位点中的至少两个具有本质上相同的结合特异性;和
b)与所述四个结合位点的每一个结合的酶成分,其中,所述酶成分中的至少三种是不同的酶成分。
2.权利要求1所述的复合物,其中,所述复合物与选自纳米颗粒、优选涂覆的和化学官能化的纳米颗粒、更优选聚苯乙烯涂覆的铁磁性纳米颗粒中的颗粒结合。
3.权利要求1或2所述的复合物,其中,所述主链支架是线性的、合成的或生物的主链。
4.权利要求1至3中任一项所述的复合物,其中,所述主链支架具有至少四个用于坞因子的黏附因子结合位点。
5.权利要求1至4中任一项所述的复合物,其中,所述主链支架由一种或多种蛋白质组成,其中,所述一种或多种蛋白质通过化学相互作用或者通过黏附因子-坞因子相互作用被连接在一起,由此连接相互作用的结合特异性与所述酶的结合特异性不同。
6.权利要求1至5中任一项所述的复合物,其中,所述主链支架得自来自形成分解纤维素的多纤维素酶体的微生物的非催化支架蛋白或其遗传修饰的衍生物。
7.权利要求1至6中任一项所述的复合物,其中,所述主链支架得自来自热解纤维梭菌的非催化支架蛋白CipA或其遗传修饰的衍生物。
8.权利要求7所述的复合物,其中,所述主链支架包含如SEQ ID NO:24中所示的CBM-c1-c1-d3,如SEQ ID NO:22所示的c3-c1-c1-d2,如SEQ ID NO:26所示的c2-c1-c1,或它们的衍生物,所述衍生物在其黏附因子组件中具有超过60%的氨基酸序列同一性。
9.权利要求1至8中任一项所述的复合物,其中,所述主链支架包含碳水化合物结合组件(CBM)。
10.权利要求9所述的复合物,其中,所述碳水化合物结合组件是被整合到或附加到线性主链支架上的来自热解纤维梭菌cipA基因的碳水化合物结合组件(CBM3)。
11.权利要求1至10中任一项所述的复合物,其中,所述酶成分包含坞因子组件和酶的催化组件。
12.权利要求1至11中任一项所述的复合物,其中,所述酶成分选自:来自多糖分解微生物的进行性或非进行性内-β-1,4-葡聚糖酶、进行性外-β-1,4-葡聚糖酶和糖苷酶或其遗传修饰的衍生物。
13.权利要求12所述的复合物,其中,所述酶成分得自热解纤维梭菌多纤维素酶体的含有坞因子组件的成分,或者得自具有被融合到其中的坞因子组件的热解纤维梭菌非多纤维素酶体成分。
14.权利要求1至13中任一项所述的复合物,其中,所述酶成分包含如SEQ ID NO:8中所示的CelK-d1,如SEQ ID NO:10中所示的CelR-d1,如SEQ ID NO:14中所示的CelT-d1,如SEQ ID NO:16中所示的CelE-d1,如SEQ ID NO:6中所示的CelS-d1,以及如SEQ ID NO:4中所示的BglB-d1,或它们的衍生物,所述衍生物在其坞因子组件中具有超过50%的氨基酸序列同一性。
15.一种制备根据权利要求1至14中任一项所述的复合物的方法,该方法包括以下步骤:
a)由重组体生产权利要求1和11-14中任一项所述的酶成分;
b)由重组体生产权利要求1和3-9中任一项所述的主链支架;
c)在体外混合a)和b)的纯化的、部分纯化的或未纯化的成分;和
d)使所述酶成分与主链支架随机地结合。
16.权利要求15所述的方法,该方法进一步包括使重组体生产的主链支架或重组体生产的酶成分与颗粒结合的步骤。
17.权利要求16所述的方法,其中,所述颗粒是纳米颗粒,优选是聚苯乙烯涂覆的铁磁性纳米颗粒。
18.权利要求15至17中任一项所述的方法,其中,步骤c)中主链支架的总量和酶成分的总量以1黏附因子组件与1酶成分的摩尔比被混合在一起,以及所述至少三种酶成分彼此以1:1至1:15的摩尔比被混合在一起。
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