[发明专利]蛋白质提纯的装置和方法

说明书

对相关申请的交叉引用

本申请要求2010年5月18日提交的美国临时专利申请序号No. 61/345,634的优先权，其全文经此引用并入本文。

发明背景

本发明大体上涉及提纯蛋白质的装置和方法。

大规模蛋白质提纯的经济性是重要的，特别是治疗性抗体而言，因为抗体构成市面上的治疗生物学的很大百分比。除它们的治疗价值外，单克隆抗体例如也是诊断领域中的重要工具。已经开发出许多单克隆抗体并用于诊断许多疾病、妊娠和用于药物测试。

典型提纯法涉及多个色谱步骤以满足纯度、收率和吞吐量要求。这些步骤通常涉及捕获、中间提纯或抛光、和最终抛光。亲和色谱法（蛋白质A或G）或离子交换色谱法常用作捕获步骤。传统上，捕获步骤后接着至少两个其它中间提纯或抛光色谱步骤以确保足够的纯度和病毒清除。中间提纯或抛光步骤通常通过亲和色谱法、离子交换色谱法或疏水相互作用等方法完成。在传统方法中，最终抛光步骤可以通过离子交换色谱法、疏水相互作用色谱法或凝胶过滤色谱法完成。这些步骤从产品流和细胞培养物中除去工艺和产品相关的杂质，包括宿主细胞蛋白（HCP）、DNA、浸出的蛋白A、聚集体、片段、病毒和其它小分子杂质。

发明概述

简言之，本发明涉及从含有要提纯的蛋白质的样品中提纯蛋白质的装置，其包含捕获色谱树脂、相对于捕获色谱树脂布置的深度过滤器以使样品经过捕获色谱树脂进入深度过滤器，和相对于深度过滤器布置的混合模式色谱树脂以使样品经过深度过滤器进入混合模式色谱树脂。

另外，本发明涉及提纯蛋白质的方法，其包括提供含有蛋白质的样品，经由捕获色谱树脂加工样品以提供包含该蛋白质的第一洗脱液，在经由捕获色谱树脂加工样品后，经由深度过滤器加工第一洗脱液以提供包含该蛋白质的过滤洗脱液，和在经由深度过滤器加工第一洗脱液后，经由混合模式色谱树脂加工过滤洗脱液以提供包含该蛋白质的第二洗脱液。

本发明还涉及提纯蛋白质的装置和方法，其包括提供含有蛋白质的样品，经由捕获色谱树脂加工样品以提供包含该蛋白质的第一洗脱液，经由深度过滤器加工第一洗脱液以提供包含该蛋白质的过滤洗脱液，和经由膜吸附器或整料加工过滤洗脱液以提供包含该蛋白质的第二洗脱液。

附图简述

图1图解该方法的一个实施方案的示意图。

图2图解该方法的一个实施方案的另一示意图。

图3图解该方法的一个实施方案的另一示意图。

图4图解该方法的一个实施方案的另一示意图。

图5a和5b图解蛋白质提纯法的HCP清除概况图。

图6a和6b图解蛋白质提纯法的浸出蛋白质A清除概况图。

图7a和7b图解蛋白质提纯法的聚集体清除概况图。

图8a和8b图解蛋白质提纯法的DNA清除概况图。

图9a和9b图解蛋白质提纯法的步骤收率。

图10a图解蛋白质提纯法在不同缓冲条件下在深度过滤器上作为XOHC进料载量的函数的HCP水平。

图10a图解在3000L生产规模下通过蛋白质A捕获/pH灭活后的深度过滤除去HCP。

图11a、11b和11c图解通过双柱蛋白质提纯法获得的杂质清除概况图。

图12a和12b图解蛋白质提纯法的HCP清除概况图。

图13a和13b图解提纯法的浸出蛋白质A清除概况图。

图14a和14b图解蛋白质提纯法的聚集体清除概况图。

图15a和15b图解蛋白质提纯法的DNA清除概况图。

图16a和16b图解蛋白质提纯法的步骤收率。

实施方案详述

现在详细参考本发明的实施方案，下面阐述其一个或多个实例。各实例作为本发明的解释而非本发明的限制提供。实际上，本领域技术人员容易看出，可以在不背离本发明的范围或精神的情况下对本发明作出各种修改和变动。例如，作为一个实施方案的一部分例举或描述的特征可用于另一实施方案以产生再一实施方案。