[发明专利]来自动物的单克隆抗体的快速分离

权利要求书

1.一种确定循环系统中的抗体序列的方法，包括：

a)获得由所受对象的成熟B细胞编码的VH和VL基因谱的核酸以及相应的氨基酸序列信息；

b)获得来源于所述所受对象的血清抗体的肽的质谱；和

c)使用所述序列信息和所述质谱确定循环系统中一个或多个抗体的VH和VL区的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述成熟B细胞来自外周血。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述成熟B细胞来自淋巴器官。

4.如权利要求1所述的方法，其中步骤a)包括确定由所述成熟B细胞编码的VH和VL基因的核酸序列以及相应的氨基酸序列。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述成熟B细胞中的所述核酸序列是通过高通量DNA测序确定的。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述高通量测序包括边合成边测序、边连接边测序、变杂交边测序、单分子DNA测序、多聚合酶群落测序、纳米孔测序或其组合。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述成熟B细胞包括记忆B细胞。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述成熟B细胞包括浆细胞。

9.如权利要求1所述的方法，其中步骤b)包括使用高效液相色谱(HPLC)。

10.如权利要求1所述的方法，其中步骤b)进一步包括分离或富集所选择类型的血清抗体。

11.如权利要求1所述的方法，其中步骤b)进一步包括分离或富集与预定抗原结合的血清抗体。

12.如权利要求1所述的方法，其中步骤b)进一步包括分离或富集血清抗体中含CDR3的片段。

13.如权利要求1所述的方法，其中步骤b)进一步包括使用基于所述序列信息所确定的蛋白酶从血清抗体制备含CDR3的肽片段。

14.如权利要求1所述的方法，其中所述所受对象患有肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病或者已经被免疫。

15.如权利要求1所述的方法，其中所述所受对象具有或者已经被暴露于为感染剂、肿瘤抗原、肿瘤细胞或自身抗原的抗原。

16.如权利要求1所述的方法，进一步包括报告步骤c)中的确定。

17.如权利要求1所述的方法，其中所述方法进一步包括确定所述血清抗体的氨基酸序列的丰度水平。

18.如权利要求1所述的方法，其中所述方法进一步包括识别至少具阈值水平丰度的抗体序列。

19.如权利要求18所述的方法，其进一步包括生成包含一个或多个的所述富有氨基酸序列中的一种或多种抗体或抗原结合片段。

20.如权利要求19所述的方法，其中每个所生成的抗体或抗原结合片段中包含相似丰度的氨基酸序列的VH和VL或者是相似丰度的高同源性氨基酸序列簇的一部分。

21.如权利要求19所述的方法，其中步骤c)中生成的抗体或抗体结合片段以100pM至5μM的单价亲和性结合所述所受对象具有或者已经被暴露于的抗原。

22.如权利要求19所述的方法，其进一步包含评估所生成的抗体或抗原结合片段对预定抗原的结合亲和性。

23.一种识别循环系统中富有抗体序列的方法，包括：

a)在所受对象的含有血清的样品中确定相应于抗体的VH和VL区的氨基酸序列以提供血清抗体序列；和

b)识别相对于其他血清抗体序列表现出至少阈值水平丰度的抗体序列。

24.如权利要求23所述的方法，其中步骤a)包括获得来源于所述所受对象的血清抗体的肽的质谱。

25.如权利要求23所述的方法，其中所确定的氨基酸序列包括完整的VH和VL区的序列。

26.如权利要求25所述的方法，其中所确定氨基酸序列包括完整抗体V结构域的序列。

27.如权利要求26所述的方法，其中确定完整抗体V结构域的序列包括配对相似丰度的VH和VL区、基于同源性比对配对VH和VL区或基于亲和测定配对VH和VL区。