[发明专利]样本内装微腔板及分析用微腔板的制造方法、分析用微腔板及样本内装微腔板制造装置套件

说明书

技术领域

本发明涉及微腔板，尤其涉及使多个的反应液无交叉污染地反应，从而能够实时测量和分析荧光值的分析用腔板，所述多个的反应液包含为了分析包含有较多数量的核酸的生物学样本溶液而与各个核酸选择性地反应的引物或探针。

并且，本发明涉及所述分析用腔板的制造方法。

并且，本发明涉及在所述分析用腔板的制造中所使用的样本内装微腔板的制造方法。

并且，本发明涉及用于制造所述样本内装微腔板的装置套件。

背景技术

所谓微腔是指进行数微升以下的微反应的容器，该微腔可以由硅晶片、玻璃、金属、陶瓷或塑料等形成，所述微腔板是指所述微腔以二维方式排列而形成的板，所述微腔板通常由一侧面能够注入样本且能够被密封的结构形成。

另外，作为测量基因的量的方法开发出了如下的实时聚合酶链反应方法（Real-Time PCR），即，该实时聚合酶链反应方法在执行聚合酶链反应（PCR，Polymerase Chain Reaction）的同时，能够实时地测量针对基因的量成比例增加的荧光值。

所述实时聚合酶链反应方法通过在每个周期测量根据执行聚合酶链反应而由聚合酶链反应产物所产生的荧光值，且确认产生预定量以上的荧光值的周期，由此能够定量分析样本的特定基因的初期浓度。

所述实时聚合酶链反应方法具有如下优点：在所述聚合酶链反应之后无需电泳过程，且通过定量地测量在进行聚合酶链反应的同时反应出的产物，能够在10⁹以上的范围内确定样本内部的具有各个特定碱基序列的基因的浓度。（A-Z of Quantitative PCR由Stephen A.Bustin编辑2004-2006International University，Realtime PCR由M.Tevfik Dorak编辑2006Taylor&Francis Group）

执行所述实时聚合酶链反应方法的实时聚合酶链反应设备有多种形态被提出，作为能够分析多个样本的实时聚合酶链反应方法设备提出了可使用标准96孔（well）、384孔板来分析96个或384个基因的设备。（罗氏（Roche）公司的Light cycler480，ABI7500、7900）

对于所述罗氏公司的实时聚合酶链反应设备而言，反应样本的量为10至50μl，具有需要比较多的量的样本，且不能分析较多数量的基因的问题。

为了解决上述问题，提出了利用微电子机械系统（MEMS，Micro ElectroMechanical Systems）技术减少反应样本的量以能够在较快的时间内同时分析较多的样本的多种方法，据此提出了利用微腔阵列板的方法。

使用微腔板的方法可以大致由将反应样本注入到所述微腔的步骤、将微腔之间的反应溶液密封的步骤、反应及分析步骤这三个步骤构成，作为第一个方案的将样本溶液个别地加入到微腔的方法，提出了如下的微腔阵列板，即，将半透过性膜覆盖到透明的细胞培养用微腔板而隔开微腔，在各个微腔中培养一个细胞之后去除培养液，然后加入水解探针（taqman）反应溶液，且为了防止蒸发而用透明油密封并进行温度循环的同时在板的底面测量荧光值。(YASUDA,Kenji EP1,541,678A1,JP2002245900NUCLEIC ACIDANALYSIS CHIP AND NUCLEIC ACID ANALYZER)

在所述方式中，需要用微量吸管吸入各个不同的溶液之后将其加入到各个微腔中，因此花费较多的时间，尤其，为了将样本注入到1,536个以上的微腔中而需要使用微细自动分注器，此时在加入各个不同的溶液之前，在清洗的过程中花费较多的时间，因而使用384板以上实属困难。

作为第二个方案，为了解决第一个方法的问题，由E.Tamiya教授组的Hidenori Nagai等提出了将硅晶片用光刻法和化学蚀刻方式构成微腔阵列的反应器。（Anal.Chem.200173,1043-1047,Development of a MicrochamberArray for Picoliter PCR）

所述反应器为了防止聚合酶链反应溶液的蒸发而利用了显微镜载玻片盖玻片，然而在覆盖所述盖玻片时和移开所述盖玻片时会引发反应液的交叉污染，因此需要将拒水性膜夹入到盖玻片与晶片之间而去除所述盖玻片之后，在等反应液干燥之后去除拒水性膜，由此进行分析，所以比较繁琐，而且具有不能使用于实时基因定量增幅的问题。