[发明专利]用于制备八叠球菌黄素及其衍生物的方法和菌株

权利要求书

1.一种八叠球菌黄素或其衍生物的制备方法，所述方法包括在宿主细胞中导入并表达对八叠球菌黄素生物合成途径中的活性进行编码的一种或多种核酸分子，其中所述一种或多种核酸分子包括：

(i)如SEQ ID NO:37所示的核苷酸序列或其一部分；

(ii)与SEQ ID NO:37具有至少90%序列同一性的核苷酸序列或其一部分；或

(iii)与(i)或(ii)互补的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述一种或多种核酸分子包括：

(i)如SEQ ID NO:26所示的核苷酸序列或其一部分；

(ii)与SEQ ID NO:26具有至少90%序列同一性的核苷酸序列或其一部分；或

(iii)与(i)或(ii)互补的核苷酸序列。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述一种或多种核酸分子编码所述八叠球菌黄素生物合成途径。

4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，所述方法还包括将所述八叠球菌黄素或其衍生物从所述宿主细胞中分离的步骤。

5.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述方法包括在宿主细胞中导入并表达：

(a)包含编码能够合成黄黄质的一种或多种蛋白的核苷酸序列的一种或多种核酸分子；和

(b)包含编码具有C₅₀类胡萝卜素γ-环化酶活性或对该活性有贡献的一种或多种蛋白的核苷酸序列的一种或多种核酸分子，其中(b)中所述一种或多种蛋白能够催化黄黄质转化为八叠球菌黄素。

6.如权利要求5所述的方法，其中，所述宿主细胞是产番茄红素的宿主细胞，优选地其中所述产番茄红素的宿主细胞能够产生至少0.5mg/g CDW水平的番茄红素，其中所述产番茄红素的宿主细胞包含质粒pAC-LYC。

7.如权利要求6所述的方法，其中，(a)中所述一种或多种蛋白能够催化番茄红素转化为黄黄质。

8.如权利要求7所述的方法，其中，所述一种或多种蛋白具有番茄红素延长酶活性。

9.如权利要求5～8中任一项所述的方法，其中，(b)中所述一种或多种核酸分子包括：

(1)编码C₅₀类胡萝卜素γ-环化酶亚基并且包含以下(i)或(ii)的核酸分子：

(i)如SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:2的全部或一部分所示的核苷酸序列或者与其简并的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:2具有至少90%序列同一性的核苷酸序列；或

(ii)编码下述蛋白的核苷酸序列，该蛋白具有：如SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:3所述的氨基酸序列的全部或一部分，或者与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:3具有至少90%同一性的氨基酸序列的全部或一部分；和

(2)编码C₅₀类胡萝卜素γ-环化酶亚基并且包含以下(i)或(ii)的核酸分子：

(i)如SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:4的全部或一部分所示的核苷酸序列或者与其简并的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:4具有至少90%序列同一性的核苷酸序列；或

(ii)编码下述蛋白的核苷酸序列，该蛋白具有：如SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的全部或一部分，或者与SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:5具有至少90%同一性的氨基酸序列的全部或一部分。

10.如权利要求5～8中任一项所述的方法，其中，(a)中所述一种或多种核酸分子包括：

(i)如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的全部或一部分所示的核苷酸序列或者与其简并的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7具有至少90%序列同一性的核苷酸序列；或

(ii)编码下述蛋白的核苷酸序列，该蛋白具有：如SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的全部或一部分，或者与SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9具有至少90%同一性的氨基酸序列的全部或一部分。