[发明专利]改进的重组人促卵泡激素

说明书

发明领域

本发明涉及促性腺激素领域。特别地，提供了改进的重组人促卵泡激素（rhFSH）。这种改进的rhFSH可用于不育症的治疗，特别是用于人类患者。

发明背景

促性腺激素是一组蛋白质激素，其调控雄性和雌性的性腺功能，因此在人类能育中起到重要作用。其是由脊椎动物脑垂体的促性腺细胞在受到促性腺激素释放激素（GnRH）刺激后分泌的。促性腺激素为异二聚体糖蛋白，包括促卵泡激素（FSH）、促黄体激素（LH）及绒毛促性腺激素(CG)。这些促性腺激素具有相同的α-亚基，但包含不同的β-亚基，后者能确保其的受体结合特异性。

FSH包含一个92个氨基酸的α-亚基以及一个111个氨基酸的β-亚基，后者赋予其对FSH受体的特异性结合。所述天然蛋白质的两个亚基都受到糖基化修饰。α-亚基在Asn52和Asn78处而β-亚基在Asn7和Asn24处进行天然糖基化。在细胞中两种亚基都是以前体蛋白质产生然后加工并分泌的。FSH调控身体的发育、生长、青春期成熟及生殖过程。特别地，其刺激生殖细胞的成熟并因此参与精子发生及卵泡发生。

卵泡发生是由FSH诱导的，例如通过FSH对粒层细胞表面上的FSH受体的结合。FSH受体为G蛋白偶联受体，其在FSH结合时激活偶联的G蛋白。然后所述G蛋白进而激活腺苷酸环化酶，导致cAMP——一种二级信使分子的产生。细胞中cAMP浓度的增加激活数种下游靶标，特别是cAMP依赖的蛋白质激酶，后者然后引起黄体酮和雌激素的合成。黄体酮和雌激素是由粒层细胞分泌的，诱导卵泡发生。在粒层细胞受到FSH刺激时，其还释放抑制素-B，这形成了一个负反馈环，从而抑制垂体中FSH的产生和分泌。已有显示抑制素B为很好替代标记物，提示有FSH造成的卵巢刺激。

FSH在对不育症的治疗中有广泛使用，可以单独或与其他试剂（特别是LH）组合使用。在本领域中，通用已经使用了纯化自绝经期后人尿液的FSH（尿FSH）或由中国仓鼠卵巢（CHO）细胞重组产生的FSH用于人类治疗。然而，由于存在不同异构体，所以有极大的与不同FSH制备相关的异质性。个体FSH异构体显示相同的氨基酸序列，但在其糖基化程度和本质上有差异。具体的异构体的特征在于碳水化合物支链结构的异质性以及不同量的唾液酸（一种带负电的末端单糖单元），这二者都影响了异构体的特异生物活性。因此，FSH的糖基化形式对其生物学活性有显著的影响。

然而，来自不同供体和不同制备物的尿液FSH在其碳水化合物结构上有显著的变化，形成高度的批-批变化。考虑到尿液制品中病毒的存在，还存在安全问题。进一步地，获自CHO细胞的FSH显示的糖基化形式特异于这些仓鼠细胞，这与人类糖基化形式不相同。这些差异导致所获得的FSH有变化的生物学活性及副作用，因此要施用于患者的药用制备物也具有这些性质。

鉴于此，本发明的一个目标就是提供改进的FSH制备物。

进一步地，本发明的一个目标是提供具有新型治疗或药用特征的FSH制备物。

进一步地，本发明的一个目标是提供具有改进的糖基化形式的FSH制备物。

发明概述

本发明人已经发现获自人类细胞的改进的FSH制备物（优选地，是以优化的糖基化水平选择的制备物）能够以比对应的获自人尿液或CHO细胞的FSH制备物更低的浓度诱导性类固醇如雌激素和黄体酮的分泌。因此，根据本发明的FSH制备物具有可用于治疗的惊人的特征。

本发明在第一方面提供了重组的FSH制备物，其中制备物中的重组FSH具有的糖基化形式包含一种或多种以下特征：

(i)携带平分型N-乙酰葡萄糖胺（bisGlcNAc）的聚糖的相对量为至少20%;

(ii)携带果糖的聚糖的相对量为至少30%;和/或

(iii)2,6-偶联唾液酸的相对量为至少30%；和/或

(iv)其为多样的糖基化形式。

在第二方面，本发明提供了重组FSH制备物，其可通过在人类细胞或人类细胞系中生产而获得，特别是细胞系GT-5s(DSM ACC3078,保藏于2010年7月28日）。据发现在各细胞系中产生的FSH产生了改进的糖基化谱，如上文和下文所描述的。

还提供了一种药用组合物，其包含根据本发明的重组FSH。

进一步地，本发明涉及根据本发明的重组FSH制备物或药用组合物，用于治疗不育症。

进一步地，本发明涉及根据本发明的重组FSH制备物或药用组合物，用于不依赖于cAMP而诱导和/或刺激性类固醇的分泌。