[发明专利]用于核酸的合成和/或检测的组合物、试剂盒及方法

权利要求书

1.聚合酶链式反应(PCR)组合物，其包含:

热稳定性DNA聚合酶;和

PCR抑制剂阻断剂,

其中所述PCR抑制剂阻断剂以有效地增强装配的PCR对PCR抑制剂的耐受性的量存在。

2.权利要求1的组合物，其中所述PCR抑制剂阻断剂为蛋白质。

3.权利要求1的组合物，其中所述PCR抑制剂阻断剂为白蛋白、明胶或其组合。

4.权利要求1的组合物，其中所述PCR抑制剂阻断剂为牛血清白蛋白、鱼胶或其组合。

5.权利要求1的组合物,其中达到50μM血色素在装配的PCR中被耐受。

6.权利要求1的组合物，其中达到15ng的腐殖酸/20μL反应体积在装配的PCR中被耐受。

7.权利要求1的组合物，其中达到0.01U/μL肝素在装配的PCR中被耐受。

8.上述权利要求的任一项的组合物，其还包含非离子型去垢剂。

9.权利要求8的组合物，其中所述非离子型去垢剂选自TRITONNonidet P-40(NP-40)、Tween20和Brij35。

10.权利要求1的组合物，其中所述组合物在室温下稳定达48小时。

11.权利要求10的组合物，其中所述组合物在室温下稳定达约72小时。

12.权利要求1的组合物，其中所述热稳定性DNA聚合酶选自Taq DNA聚合酶、Tne DNA聚合酶、Tma DNA聚合酶、Pfu DNA聚合酶、Pwo DNA聚合酶、VENT DNA聚合酶、DEEPVENT DNA聚合酶、其突变体或衍生物以及上述酶的组合。

13.权利要求1的组合物，其中所述热稳定性DNA聚合酶的浓度为约100至约500个单位/毫升。

14.权利要求1的组合物，其还包含用于热启动PCR的试剂。

15.权利要求14的组合物，其中所述试剂为抗体、适体、发夹型引物或隔离石蜡珠。

16.权利要求1的组合物，其还包含一种或多种脱氧核苷三磷酸。

17.权利要求1的组合物，其还包含尿嘧啶DNA糖基化酶。

18.权利要求1的组合物，其还包含被动参考对照。

19.权利要求1的组合物，其中所述组合物是浓缩原液。

20.权利要求1的组合物，进一步包含甘油。

22.权利要求1的组合物，其中对于相同量的模板，所述组合物的检测限度比商购可得的PCR试剂混合物低至少一个对数。

23.权利要求22的组合物，其中对于相同量的模板，所述组合物的检测限度比商购可得的PCR试剂混合物低至少两个对数。

24.权利要求1的组合物，其中对于相同量的模板，所述组合物在PCR中产生的阈值C_t低于使用商购可得的PCR试剂混合物获得的C_t。

25.包含权利要求1的组合物的试剂盒，其还包含对照核酸样品和特异于对照核酸样品中的DNA靶的PCR扩增的引物对。

26.权利要求25的试剂盒，进一步包含引物和探针。

27.用于进行核酸合成的方法，包括:

向反应容器中添加权利要求1的组合物;

向反应容器中添加核酸样品和引物；和

使用核酸样品作为模板合成核酸。

28.用于装配聚合酶链式反应(PCR)的方法，包括：

向反应容器中添加权利要求1的组合物；和

向反应容器中添加核酸样品和引物。

29.权利要求28的方法，进一步包括对核酸样品进行PCR。

30.用于通过聚合酶链式反应(PCR)扩增核酸的方法，包括：

向反应容器中添加权利要求1的组合物；

向反应容器中添加核酸样品和引物；和

对核酸样品进行PCR。