[发明专利]用于培养羊膜来源间充质干细胞的培养基组合物和用其培养羊膜来源间充质干细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于培养间充质干细胞的培养基，更特别涉及一种用于培养间充质干细胞的培养基组合物和使用所述培养基组合物培养间充质干细胞的方法，其中所述培养基组合物含有基础培养基、L-抗坏血酸2-磷酸盐、胎牛血清、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、非必需氨基酸(NEAA)、胰岛素、N-乙酰基-L-半胱氨酸、氯化钙和氢化可的松。

背景技术

干细胞是指不仅具有自我复制能力而且还具有分化为至少两种细胞的能力的细胞，并且可分为全能干细胞(totipotent stem cell)、多能干细胞(pluripotent stem cell)和多向干细胞(multipotent stem cell)。

成体干细胞通过从各种人器官获取细胞并使细胞发育成干细胞而获得，成体干细胞的特点是它们仅分化为特定组织。然而，近来将成体干细胞分化为包括肝细胞在内的多种组织的实验获得了巨大成功，成为众目之焦点。

多向干细胞最初分离自成体骨髓(Y. Jiang等人,Nature,418:41,2002)，随后在其他几种成体组织中也有发现(C.M.Verfaillie,Trends Cell Biol.,12:502,2002)。换句话说，骨髓是最广为人知的干细胞源，多功能性干细胞也发现于皮肤、血管、肌肉和脑中(J.G. Toma等人,Nat.Cell Biol.,3:778,2001;M.Sampaolesi等人,Science,301:487,2003;Y. Jiang等人,Exp.Hematol.,30:896,2002)。然而，干细胞很少存在于成体组织如骨髓中，并且没有诱导分化则该细胞难以培养，因此在不存在特定筛选的培养基的情况下难以培养。即，难以在体外维持所分离的干细胞。同时，从胎儿组织分离间充质干细胞的研究结果显示，胎儿组织中有丰富的间充质干细胞。然而，将胎儿组织用作细胞治疗剂的来源已受到伦理方面的限制。也可从作为胎儿间充质干细胞(MSCs)源的脐带血(UCB)中分离间充质干细胞，但是它们的数量非常少，且且显示出弱的增殖性。

近年来，已知间充质干细胞存在于羊膜(羊膜内膜（amniotic lining membrane）)中，即，胎盘和发育的哺乳动物胚胎周围的最内薄膜凹陷(thin innermost membrane sag)。因此，已经开发了分离和培养该间充质干细胞的技术(PCT国际专利公开WO2006/019357，韩国专利注册号0795708和0818214)。

然而，培养羊膜来源的干细胞的常规方法的缺点是干细胞增殖的时间长。

因此，本发明人通过大量努力建立了一种能提高羊膜来源的干细胞的增殖率同时保持分化能力的方法，并由此发现当羊膜来源的干细胞在含有DMEM-P和KSFM-P的培养基中培养时，细胞增殖能力可得到提高同时保持分化能力，由此实现了本发明。

发明内容

技术问题

本发明的一个目的是提供一种用于培养间充质干细胞的培养基，其使细胞显示高增殖率同时使细胞保持分化能力。

本发明的另一个目的是提供一种使用上述培养基培养间充质干细胞的方法。

技术方案

为达到上述目的，本发明提供了一种用于培养间充质干细胞的培养基组合物，其含有基础培养基、L-抗坏血酸2-磷酸盐、胎牛血清、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、非必需氨基酸(NEAA)、胰岛素、N-乙酰基-L-半胱氨酸、氯化钙和氢化可的松。

本发明还提供一种用于培养间充质干细胞的方法，所述方法包括在上述培养基组合物中培养间充质干细胞。

通过以下详细描述和所附权利要求使本发明的其他特征和实施方案更明显。

附图说明

图1显示了在DMEM-P、KSFM-P或DMEM-P和KSFM-P的混合培养基中培养3天的羊膜来源间充质干细胞的图片。

图2是在DMEM-P、KSFM-P或DMEM-P和KSFM-P的混合培养基中培养4天的羊膜来源间充质干细胞的图片。

图3显示了各组针对CD31的流式细胞分析结果。

图4显示了各组针对CD34的流式细胞分析结果。

图5显示了各组针对CD45的流式细胞分析结果。

图6显示了各组针对CD29的流式细胞分析结果。

图7显示了各组针对CD44的流式细胞分析结果。

图8显示在各组针对CD73的流式细胞的结果。