[发明专利]具有增强的3’-错配辨别力的DNA聚合酶

权利要求书

1.DNA聚合酶，与对照DNA聚合酶相比，其具有增强的3'-错配辨别力活性，其中所述DNA聚合酶在聚合酶结构域中包含基序，所述基序包含

A-G-H-P-F-N-L-N-X₆-R-D-Q-L-X₁₀-R-V-L-X₁₃-D-E-L，其中：

X₆是S、G、A、D、F、K、C、T或Y；

X₁₀是除E以外的任何氨基酸；以及

X₁₃是F、A、G、S、T、Y、D或K (SEQ ID NO:8)。

2.权利要求1的DNA聚合酶，其中X₁₀选自R、K、A或G (SEQ ID NO:49)。

3.权利要求1的DNA聚合酶，其在聚合酶结构域中包含基序，所述基序包含

A-G-H-P-F-N-L-N-S-R-D-Q-L-X₁₀-R-V-L-F-D-E-L，其中：

X₁₀是除E以外的任何氨基酸(SEQ ID NO:9)。

4.权利要求3的DNA聚合酶，其中X₁₀是A、G、K或R (SEQ ID NO:10)。

5.权利要求1-4中任一项的DNA聚合酶，进一步包含基序，所述基序包含

T-G-R-L-S-S-X₇-X₈-P-N-L-Q-N；其中

X₇是Ser (S)或Thr (T)；以及

X₈是除D或E以外的任何氨基酸(SEQ ID NO:27)。

6.权利要求5的DNA聚合酶，其中对应于X₈位的氨基酸选自L、G、T、Q、A、S、N、R和K (SEQ ID NO:51)。

7.权利要求1-6中任一项的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶包含与SEQ ID NO: 1、2、3、4、5、6、7、36、37、38、39、40或41至少80％，优选至少90％，更优选至少95％序列相同的氨基酸序列。

8.权利要求7的DNA聚合酶，其中所述聚合酶与SEQ ID NO:1具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％的序列同一性。

9.权利要求8的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶是Z05 DNA聚合酶，SEQ ID NO:1的580位的氨基酸选自L、G、T、Q、A、S、N、R和K。

10.重组核酸，其编码权利要求1-9中任一项的DNA聚合酶。

11.表达载体，其包含权利要求10的重组核酸。

12.进行引物延伸的方法，包括

在适于引物延伸的条件下将权利要求1-9中任一项的DNA聚合酶与引物、多核苷酸模板和三磷酸核苷接触，从而产生延伸的引物。

13.产生延伸的引物的试剂盒，包括：

至少一个提供权利要求1-9中任一项的DNA聚合酶的容器。

14.权利要求13的试剂盒，进一步包括一个或更多个额外的容器，所述容器选自：

(a) 容器，其提供在引物延伸条件下与预定的多核苷酸模板可杂交的引物；

(b) 容器，其提供三磷酸核苷；以及

(c) 容器，其提供适合用于引物延伸的缓冲剂。

15.反应混合物，包含权利要求1-9中任一项的DNA聚合酶，至少一种引物，多核苷酸模板和三磷酸核苷。