[发明专利]具有增强的3’-错配辨别力的DNA聚合酶

权利要求书

1.DNA聚合酶，与对照DNA聚合酶相比，所述DNA聚合酶具有增强的3'-错配辨别力活性，其中对应于SEQ ID NO:1的547位的所述DNA聚合酶的氨基酸是除Y以外的任何氨基酸，其中除了对应于SEQ ID NO:1的547位的所述对照DNA聚合酶的氨基酸是Y，所述对照DNA聚合酶具有与所述DNA聚合酶相同的氨基酸序列。

2.权利要求1的DNA聚合酶，在聚合酶结构域中包含基序，所述基序包含

K-L-X₁-X₂-T-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈，其中：

X₁是K、R或Q；

X₂是N、S或G；

X₃是除Y以外的氨基酸；

X₄是V、I或L；

X₅是D或E；

X₆是P、A、T、S或G；

X₇是L或I；以及

X₈是P或L (SEQ ID NO:8)。

3.权利要求1的DNA聚合酶，在聚合酶结构域中包含基序，所述基序包含

K-L-K-X₂-T-X₃-X₄-D-X₆-L-P，其中：

X₂是N或S；

X₃是除Y以外的氨基酸；

X₄是V或I；以及

X₆是P或A (SEQ ID NO:9)。

4.权利要求1的DNA聚合酶，在聚合酶结构域中包含基序，所述基序包含

K-L-K-X₂-T-X₃-X₄-D-P-L-P，其中：

X₂是S或N；

X₃是除Y以外的氨基酸；以及

X₄是V或I (SEQ ID NO:10)。

5.权利要求4的DNA聚合酶，其中X₃是C或N (SEQ ID NO:11)。

6.权利要求1-5中任一项的DNA聚合酶，其中对应于SEQ ID NO:1的580位的氨基酸是除D或E以外的任何氨基酸。

7.权利要求1-6中任一项的DNA聚合酶，其中对应于SEQ ID NO:1的580位的氨基酸选自L、G、T、Q、A、S、N、R和K。

8.权利要求1-7中任一项的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶包含与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、36、37、38、39、40或41至少80％，优选至少90％，更优选至少95％序列相同的氨基酸序列。

9.权利要求6或7中任一项的DNA聚合酶，其中所述聚合酶与SEQ ID NO:1具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％的序列同一性。

10.权利要求9的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶是Z05 DNA聚合酶，所述580位的氨基酸选自L、G、T、Q、A、S、N、R和K。

11.重组核酸，其编码权利要求1-10中任一项的DNA聚合酶。

12.进行引物延伸的方法，包括

在适于引物延伸的条件下将权利要求1-10中任一项的DNA聚合酶与引物、多核苷酸模板和三磷酸核苷接触，从而产生延伸的引物。

13.产生延伸的引物的试剂盒，包括：

至少一个提供权利要求1-10中任一项的DNA聚合酶的容器。

14.权利要求13的试剂盒，进一步包括一个或更多个额外的容器，所述容器选自：

(a) 容器，其提供在引物延伸条件下与预定的多核苷酸模板可杂交的引物；

(b) 容器，其提供三磷酸核苷；以及

(c) 容器，其提供适合用于引物延伸的缓冲剂。

15.反应混合物，包含权利要求1-10中任一项的DNA聚合酶，至少一种引物，多核苷酸模板和三磷酸核苷。