[发明专利]新的土壤微生物、从所述土壤微生物分离的新氧化还原酶、编码所述氧化还原酶的基因和使用所述微生物、氧化还原酶和基因产生糖苷配基的方法

说明书

技术领域

本文内容涉及一种从土壤分离的新的微生物，从所述微生物分离的氧化还原酶，以及利用上述物质将各种植物糖苷去糖基化并产生各种糖苷配基的方法。

背景技术

人参(Panax ginseng C.A.Meyer)是一种草药，在亚洲国家包括朝鲜、中国和日本其通常用于多种疾病的治疗和预防。人参皂苷是人参的主要活性成分，已知具有多种生理活性，包括在中枢神经系统、心血管系统和免疫系统中的抗衰老活性、抗炎活性、抗氧化活性、抗糖尿病活性和抗肿瘤活性。

迄今为止，已经分离并鉴定出超过40种人参皂苷。人参皂苷(其是具有包括糖苷配基的达玛烷结构的糖苷)大致上可以分为原人参萜二醇和原人参萜三醇。属于原人参萜二醇类的人参皂苷主要是Rb1、Rb2、Rc和Rd，属于原人参萜三醇类的人参皂苷主要是Re和Rg1(参见图1和图2)。

吸收后，人参皂苷通过肠道微生物代谢，已知代谢产物具有多种生理活性。例如，典型的基于原人参萜二醇的皂苷Rb1、Rb2和Rc被人肠道微生物代谢为CK，基于原人参萜三醇的皂苷Re和Rg1被肠道微生物代谢为Rh1或F1，进而显示多种生理活性。已知CK诱导预防肿瘤侵袭和形成的抗转移或抗癌功效。并且，据报道与糖附着的对应物Rh2相比，其糖苷配基PPD(S)具有更高的生理活性。

因此，已经研究将人参皂苷转化为具有更少糖的代谢物。除了酶促法之外，已经报道了使用弱酸的水解，使用碱的降解等等。但是，因为这些方法诱导数种副反应诸如差向异构、水合、羟化等等，所以最近研究了使用酶、肠道微生物等等转化为活性人参皂苷的方法。但是，大部分报道的微生物是厌氧肠道微生物，在工业应用中存在限制。此外，因为大部分酶缺乏将人参皂苷转化为糖苷配基的活性并具有它们自己的特异性，它们只适用于特定人参皂苷的生产。

尽管到目前为止已对通过肠道微生物将人参皂苷Rb1的代谢物生物转化为CK进行了大量研究，但对其糖苷配基的产生几乎没有研究。并且，据报道，在皂苷主链上具有一个糖的人参皂苷不再被微生物的酶所降解。已知糖苷配基形式的人参皂苷更容易被吸收入血流并作为活性化合物起作用。此外，作为多种人参皂苷骨架的糖苷配基的产生将为所需人参皂苷类型的特定生产提供基础技术。因此，需要探索参与人参皂苷糖苷配基产生的酶。

发明内容

技术问题

本文内容涉及提供一种新的微生物，从所述微生物分离的显示去糖基化活性的一种新的氧化还原酶和一种使用编码所述氧化还原酶的基因和重组蛋白产生多种人参皂苷糖苷配基、异黄酮糖苷配基或类黄酮糖苷配基的方法。

技术方案

在一个一般方面，提供新的根瘤菌(Rhizobium sp.)GIN611(KCTC11708BP)或其细胞提取物。

在另一个一般方面，提供一种使用根瘤菌GIN611或其细胞提取物作为生物催化剂将天然产物去糖基化的方法。

在另一个一般方面，提供一种使用根瘤菌GIN611或其细胞提取物作为生物催化剂从多种糖苷产生糖苷配基的方法。

在另一个一般方面，提供具有SEQ ID NO3的氨基酸序列的氧化还原酶或包括所述氧化还原酶的细胞提取物。

在另一个一般方面，提供编码具有SEQ ID NO3的氨基酸序列的氧化还原酶的DNA，具有SEQ ID NO2序列的DNA，包括具有SEQ ID NO2序列的DNA的重组DNA载体，用包括具有SEQ ID NO2序列的DNA的重组DNA载体转化的宿主细胞或包括用包括具有SEQ ID NO2序列的DNA的重组DNA载体转化的宿主细胞的细胞提取物。

在另一个一般方面，提供一种与SEQ ID NO3的序列具有至少60%的序列相同性并具有去糖基化活性的氧化还原酶或包括所述氧化还原酶的细胞提取物。